食品中亚硝酸盐的提取优化及含量检测 毕业论文.docx

长江大学工程技术学院毕业论文题 目 名 称食品中亚硝酸盐的提取优化及含量检测系 部化学工程系专 业 班 级化工61001班学 生 姓 名 指 导 教 师 辅 导 教 师时 间 2013年10月至 2014年6月目 录任务书开题报告指导教师审查意见评阅教师评语答辩会议记录中文摘要外文摘要1 前言.12 选题背景13 方案选择84实验部分84.1 实验原理.84.2 试剂和材料.84.3 仪器和设备.94.4 实验方法.94.5 实验结果与讨论125 实验结论156 总结15参考文献15致谢18选题背景第3页（共13页）长江大学工程技术学院毕业设计(论文)任务书 1毕业设计(论文)题目： 食品中亚硝酸盐的提取优化及含量检测2毕业设计(论文)起止时间： 2013年 10月1 日 2013年6月1 日3毕业设计(论文)所需资料及原始数据（指导教师选定部分）1王宪泽.蔬菜中的亚硝酸盐及其影响因子J.植物学报，1991,8（3）:34-37.2胡长敏，赵丽辉，丁蕴铮等.新鲜蔬菜和水果中亚硝酸盐测定方法研究J.环境化学，2000,19（2）：181-186.3 李健，潘秋月，姚徽，等.超声波提取蔬菜中硝酸盐、亚硝酸盐的研究J.化学与黏合，2007，(60)：408-412.4 陈秋生，梁淑轩，李科，等.蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐的不同提取方法及含量测定J.河北大学学报：自然科学版，2007,27（2）：174-178.5 卫生部食品卫生监督检测所.GB/T 500933-2003 食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定S.北京:标准出版社，2004:259-262.6 谭燕，庄松娟.肉制品中亚硝酸盐国标法测定方法的探究J.肉类工业，2005,291（7）：26-27.4毕业设计(论文)应完成的主要任务（1）查阅文献，提出实验方案，2013年3月5日前完成开题报告。（2）2013年4月16日前完成英文翻译工作，内容在3千个英文印刷字符以上。（3）拟定实验方案，并完成实验；（4）2013年5月25日前提交毕业设计（论文）初稿，要求排版格式规范，字数在12000左右。5任务书下达日期 2013 年 10月 1 日 指导教师(签字) 长江大学工程技术学院毕业论文开题报告题 目 名 称食品中亚硝酸盐的提取优化及含量测定系 部化学工程与工艺专 业 班 级化工61001班学 生 姓 名 指 导 教 师 辅 导 教 师 开题报告时间 年 月 日食品中亚硝酸盐的提取优化及含量测定 一、题目来源题目来源于生产实际。二、研究目的和意义亚硝酸盐是肉制品加工过程中常用的添加剂，可使肉制品中的肌红蛋白与硝酸盐中分解出的一氧化氮结合，生成亚硝酸肌红蛋白，出现较鲜红的颜色。亚硝酸盐兼有发色剂及防腐剂的性能，有利于肉制品长期储存。如果肉制品中硝酸盐或亚硝酸盐使用量超过一定标准时，就会产生有毒物质亚硝胺。此外，近年来，随着经济的发展和饮食文化的交流，酸菜作为一种腌制菜，一年四季以其独特品味受到各地人们的喜爱，酸菜制作也从家庭制作发展到工业生产，从传统的发酵发法发展到现代工业生产。但在酸菜腌制发酵过程中，由于自然界中各种微生物的存在，特别是在各种还原菌和酶的作用下，硝酸盐被还原为亚硝酸盐。亚硝酸盐是一种对人体有害的化学物质，在人体内能与蛋白质分解产生的多种氨基酸化合物合成强致癌物质亚硝胺。亚硝胺是公认的强致癌物质，对人体有极大的危害。因此，在食品安全问题备受瞩目的今天，亚硝酸盐和硝酸盐的含量已成为评价食品，特别是评价蔬菜及肉制品安全品质的一个重要检测指标。进行食品安全分析检测的样品对提取过程的要求相对比较严格，因其直接影响到最终的检测结果是否达到国家标准。国标法的盐酸萘乙二胺比色法由于具有精确度高，使用仪器设备简单，可操作性强适用于基层单位等特点而成为一种经典的亚硝酸盐检测方法。三、阅读的主要参考文献1王宪泽.蔬菜中的亚硝酸盐及其影响因子J.植物学报，1991,8（3）:34-37.2苗玉新.降低蔬菜中亚硝酸盐含量的途径J.农业系统科学与综合研究，1998,14（1）：69-71.3胡长敏，赵丽辉，丁蕴铮等.新鲜蔬菜和水果中亚硝酸盐测定方法研究J.环境化学，2000,19（2）：181-186.4中华人民共和国国家标准GB/T5009.33-2008S.食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定，2008.5中华人民共和国农业行业标准，NY/T1279-2007S.蔬菜、水果中亚硝酸盐的测定紫外分光光度法.6李健，潘秋月，姚徽，等.超声波提取蔬菜中硝酸盐、亚硝酸盐的研究J.化学与黏合，2007，(60)：408-412.7陈秋生，梁淑轩，李科，等.蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐的不同提取方法及含量测定J.河北大学学报：自然科学版，2007,27（2）：174-178.8邬方宁.超声提取技术在现代中药中的应用J.中草药，2007,38（2）：315-316.9黄国平，温其标，杨晓泉，等。超声波法提取玉米醇溶蛋白的研究J.食品与发酵工业，2002,28（10）：1-5.10卫生部食品卫生监督检测所.GB/T 500933-2003 食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定S.北京:标准出版社，2004:259-262.11刘艳红，宋秀环，朱慧，等.紫外分光光度法测定肉制品中亚硝酸盐J.光谱实验室，2004,21（6）：1119-1120.12谭燕，庄松娟.肉制品中亚硝酸盐国标法测定方法的探究J.肉类工业，2005,291（7）：26-27.四、国内外现状和发展趋势现今，食品安全问题越来越受到重视，国家卫生标准对不同的食品中的亚硝酸盐含量有明确的规定，国家及地方企业检测方法有多种，为了更准确地反映食品中亚硝酸盐含量状况，对食品中亚硝酸盐的提取过程要求相对比较严格，因其直接影响到最终的检测结果是否达到国家标准。目前比较常见的提取方法有国标提取法、振荡提取法、超声波提取法。超声波提取法为3种提取方法中最佳提取法，具有简便快速、高效节能、重复性好、不影响提取物的活性等许多传统方法无法比拟的优点。关于食品中亚硝酸盐的检测方法，随着新方法和新技术的不断出现和发展，其检测方法更加多样化，目前主要有荧光法、离子色谱法、电位法、示波极谱法、流动注射分光光度法、顺序注射光度法、光度比色法、毛细管电泳法等。但现行方法中国标采用分光光度法和离子色谱法。这些测定亚硝酸盐含量的方法都用仪器来分析，其在操作方面不那么简单，测定样品必须先测定标准曲线。因此研究简单易操作的检测亚硝酸盐含量的方法很有实际意义。目前有一种新的方法用于测定食品中亚硝酸盐含量，即为酸性条件下利用亚硝酸盐具有氧化性特性氧化KI生成I2，I2和淀粉作用灵敏地生成I2-淀粉蓝色络合物的特效反应，建立光度法测定食品中亚硝酸盐含量的新分析方法。五、主要研究内容、关键问题及解决思路5.1 主要研究内容（1）选取样品中亚硝酸盐的几种不同提取方法食品中亚硝酸盐可以通过多种方法提取，本次试验采用三种不同提取法提取腌制食品中的亚硝酸盐，这三种方法分别是振荡提取法、超声波提取法、国标提取法（水浴提取法）。通过比较亚硝酸盐的回收率，确定最佳提取方法。参考文献可知，超声波提取效果远高于国标法和振荡提取法，接下来还需要通过试验确定具体的超声时间，本试验选择5、10、15、20、30min作为超声提取时间，选出提取效果最佳的超声时间。（2）确定样品中亚硝酸盐含量检测 亚硝酸盐含量的测定采用盐酸萘乙二胺比色法。由于具有精确度高、使用仪器设备简单、可操作性强、使用于基层单位等特定而成为一种经典的亚硝酸盐检测方法。即先绘制亚硝酸钠使用液的标准曲线，再取样液，对其处理后在同样的波长下测其吸光度，从标准曲线上查出相应的亚硝酸钠的质量。同一样品平行测定3次，取平均值，计算式样中亚硝酸盐的质量分数（以mg/kg表示）。同时做加标回收试验，按上述方法计算加入标准液后的回收率。（3）选择适当的仪器，药品及材料进行实验。（4）根据公式计算不同提取方法下亚硝酸盐含量及其回收率，比较测定结果，从而确定最佳提取方法。（5）得出结论。5.2 关键问题材料的选择，方案的选择与优化，该材料中亚硝酸盐的提取、含量测定及回收结果的测定，最后得出结论。5.3 解决思路参考各种文献资料，选择不同方案提取食品中亚硝酸盐并对其含量进行测定，而后通过加标回收试验，确定出最优的提取方案。六、完成毕业设计（论文）所必须具备的工作条件（1）查阅相关的中文文献篇，阅读（2）查找相关的外文文献，并翻译（3）查阅资料并确定具体的实验方案，选择需要的实验仪器，药品及样品进行实验七、预期成果（达到目标）按时完成老师安排的任务，完成毕业论文。根据查阅的资料，确定实验方案并完成实验。八、工作的主要阶段、进度与时间安排第一阶段：2013年10月01日2013年12月10日，查寻资料；第三阶段：2013年3月1日2013年3月15日，外文文献翻译的编写；第二阶段：2013年3月15日2013年4月10日，总结文献资料，拟定实验方案，撰写开题报告；第四阶段：2013年4月15日2013年5月15日，开始做实验；第五阶段：2013年5月16日2013年6月01日，撰写论文。九、指导老师审查意见指导教师（签字）： 年 月 日长江大学工程技术学院毕业设计(论文)指导教师审查意见学生姓名专业班级毕业设计(论文)题目指导教师职 称审查日期审查参考内容：毕业设计(论文)的研究内容、研究方法及研究结果，难度及工作量，质量和水平，存在的主要问题与不足。学生的学习态度和组织纪律，学生掌握基础和专业知识的情况，解决实际问题的能力，毕业设计(论文)是否完成规定任务，达到了学士学位论文的水平，是否同意参加答辩。审查意见：指导教师签名： 评定成绩（百分制）：_分长江大学工程技术学院毕业设计(论文)评阅教师评语学生姓名专业班级毕业设计(论文)题目评阅教师职 称评阅日期评阅参考内容：毕业设计(论文)的研究内容、研究方法及研究结果，难度及工作量，质量和水平，存在的主要问题与不足。学生掌握基础和专业知识的情况，解决实际问题的能力，毕业设计(论文)是否完成规定任务，达到了学士学位论文的水平，是否同意参加答辩。评语：评阅教师签名： 评定成绩（百分制）：_分（注：此页不够，请转反面）长江大学工程技术学院毕业设计(论文)答辩记录及成绩评定学生姓名专业班级毕业设计(论文)题目答辩时间 年 月 日 时答辩地点一、答辩小组组成答辩小组组长：成 员：二、答辩记录摘要答辩小组提问（分条摘要列举）学生回答情况评判三、答辩小组对学生答辩成绩的评定（百分制）：_分 毕业设计(论文)最终成绩评定(依据指导教师评分、评阅教师评分、答辩小组评分和学校关于毕业设计(论文)评分的相关规定)等级(五级制)：_答辩小组组长(签名) ： 秘书(签名)： 年 月 日系答辩委员会主任(签名)： 系 (盖章)食品中亚硝酸盐的提取优化及含量检测学 生：陈蔓，化学工程系指导教师：易洪潮，化学工程系摘要 随着人们生活水平的不断提高，食品安全问题越来越受人们重视。我国亚硝酸盐中毒事件频发，食品中的亚硝酸盐是否符合国家标准已成为研究热点。膳食中亚硝酸盐来源很多，除作为食品添加剂和环境中本底硝酸盐外，主要来源是农田施用的大量氮肥。本实验以蔬菜作为原材料，采用了超声波提取法、振荡提取法、国标提取法三种提取方法，并着重探究了提取的最佳条件：提取剂、提取时间、温度；采用国标法中盐酸萘乙二胺法测定提取液中亚硝酸盐含量，同时做加标回收比较测定结果。结果表明：以10%乙醇作为提取剂，超声波提取，提取时间为10min，并置于沸水浴中提取，这样所得到的提取效果最佳。与国标法相比，超声提取法简便、快捷、检测结果准确度比较高。且10%乙醇作为提取剂时，所测得的亚硝酸盐含量与国标法有显著差异，而用其余的溶剂提取时，测得结果与国标法无显著差异。此外，利用10%乙醇提取的亚硝酸盐的回收率达到100.3%。建议用10%乙醇代替国标法中的硼砂溶液来提取蔬菜中的亚硝酸盐。关键词 蔬菜 超声提取法 亚硝酸盐 溶剂 盐酸萘乙二胺Optimization of the extraction of nitrite in foods and content detection Student：Chen Man， Department of Chemical Engineering Supervisor：Yi Hong Chao，Department of Chemical Engineering Abstract With the continuous improvement of people's living standards, food safety issues is getting more and more attention. The nitrite poisoning occur frequently in our country, nitrite in food whether can meet the national standard has become a hot research topic. There are many dietary sources of nitrite. In addition to nitrate as the bottom of the food additives and in environment, the main source is a lot of nitrogen fertilizer applied to farmland. In this experiment, vegetables as raw the material, using ultrasonic extraction, shaking extraction, GB extraction three extraction methods. And focus on exploring the optimal conditions for the extraction: extraction agent, extraction time and temperature; Determination of nitrite content in extracts by hydrochloride naphthodlamide, and standard recovery is conducted to compared with the determination results. The results show that: with 10% ethanol as extracting agent, ultrasonic extraction, 10min- extraction, and placed in a boiling water bath for Extraction. The best results of extraction is obtained. Compared with the GB method, ultrasonic extraction method is more simple, faster and higher accuracy of the test results. And 10% ethanol as extraction agent, there are significant differences between nitrite content in this measure and GB method. While using the rest of the solvent extraction the measured results showed no significant difference with GB method. In addition, using 10% ethanol for extraction, the recovery rate of nitrite is 100.3%. Suggestions is that using 10% ethanol in place of borax solution in GB method of to extract nitrite in vegetables.Keywords vegetables；ultrasonic extraction；nitrite；solvent；naphthyl ethylenediamine dihydrochloride食品中亚硝酸盐的提取优化及含量检测1 前言亚硝酸盐是肉制品及其他食品加工过程中常用的一种食品添加剂，具有抑制肉毒梭状芽孢杆菌，使肉品发色以及增强风味的作用1。另外还具有发色剂及防腐剂的性能，有利于食品长期储存，延长保质期。亚硝酸进入人体后可使血液中的血红蛋白而失去运氧能力，引起呼吸困难甚至死亡。更为严重的是亚硝酸盐与含带蛋白食物在适当条件下生成亚硝酸铵，亚硝酸铵是公认的致癌物。当人们大量食用时，还能引起急性食物中毒。由亚硝酸盐引起食物中毒的机率较高，食用0.30.5g的亚硝酸盐即可引起食物中毒甚至死亡2。在食品安全备受世人瞩目的今天，亚硝酸盐和硝酸盐的含量已成为评价食品，特别是评价蔬菜及肉制品安全品质的一个重要检测指标。因此，如何有效提取食品中的亚硝酸盐及其真实含量的检测是一件特别有意义的工作查阅文献报道得知，亚硝酸盐的提取方式主要有：振荡提取法、超声波提取法、水浴提取法，每种提取方法下又有不同的因素：提取时间时间、提取温度、提取剂、提取功率会影响提取效果。关于亚硝酸盐的检测，前人也研究出众多方法，比如：分光光度法、离子色谱法3-4、荧光法5-8、示波极谱法、催化动力学9、气相色谱法等。本实验希望以酸菜作为原材料，探讨原料中亚硝酸盐提取方式和提取条件的优化，并对其含量进行检测，为进一步发展食品中亚硝酸盐含量的测定和监测提供参考。2 选题背景亚硝酸盐是广泛存在于自然环境中的化学物质，特别是在食物中，亚硝酸盐通常被称为工业用盐，为一种白色或微黄色结晶，有的为颗粒状粉末，无臭、味微咸涩，易潮解，易溶于水。除用于染料生产和某些有机合成、金属表面处理等工业外，在食品生产中亦用作食品着色剂和防腐剂。在食品加工中允许用于肉及肉制品的生产加工，添加亚硝酸盐可以抑制肉毒 芽孢杆菌，并使肉制品呈现鲜红色，但是亚硝酸盐的添加使肉制品中亚硝酸盐残留。我国食品添加剂使用卫生标准规定在肉制品中亚硝酸盐的使用量不得超过0.15g/kg10。酱腌菜中亚硝酸盐(以NaNO2计)含量不得超过 20 mg/ kg11，而婴儿配方乳粉中的残留量不得超过2mg/kg。此外，粮食、蔬菜、肉类和鱼类都含有一定量的亚硝酸盐。比如蔬菜中约有4 mg/ kg，肉类约有3 mg/ kg，食品中亚硝酸盐的提取优化及含量检测蛋类约有5 mg/ kg，豆粉中的平均含量可以达到10 mg/ kg。许多天然的农副产品本身含有亚硝酸盐，并且在食品加工过程中也会产生。 亚硝酸盐的生物毒性：亚硝酸盐中毒是指由于食用硝酸盐或亚硝酸盐含量较高的腌制肉制品，泡菜及变质的蔬菜可引起中毒，或者误将工业用亚硝酸钠作为食盐食用而引起，也可见于饮用含有硝酸盐或亚硝酸盐苦井水，蒸锅水后，亚硝酸盐被吸收进入血液与血红蛋白结合，将低铁血红蛋白氧化为高铁血红蛋白，并使其失去携氧能力，导致组织缺氧。另外，亚硝酸盐对周围血管有麻痹作用，中毒的特征性表现为紫绀，症状体征有头痛、头晕、乏力、胸闷、气短、心悸、恶心、呕吐、腹痛、腹泻、口唇、指甲及全身皮肤和黏膜紫绀等。严重者意识朦胧、烦躁不安、昏迷、呼吸衰竭和死亡。因此，控制亚硝酸盐的摄入量，对于维护人体健康至关重要。蔬菜在人们日常膳食中必不可缺。当前我国蔬菜在种植过程中化肥过量施用,而且有些蔬菜生产者采用工业废水和生活污水浇地,造成许多蔬菜中硝酸盐含量过高。虽然硝酸盐对人体没有直接毒害作用，但它在人体内的酶和微生物作用下可转变成有毒的亚硝酸盐。此外，近年来,人们为了储存的方便同时也为追求口感的享受,将蔬菜制作成一种腌制菜，一年四季以其独特品味受到人们普遍的喜爱，酸菜制作也从家庭制作发展到工业化生产12。但在酸菜腌制发酵过程中，由于自然界各种微生物的存在，特别是在各种还原菌和酶的作用下，硝酸盐被还原成有毒的亚硝酸盐，通常都伴有“亚硝峰”的现象出现。在腌制过程中亚硝酸盐的含量同盐浓度和温度密切相关食盐为5-10%时，温度愈高，所产生的亚硝酸盐含量随之增加；食盐浓度达到15%时，温度在15-20或37，亚硝酸盐含量均无明显变化。腌制第2-4天亚硝酸盐含量有所增加，到第7-8天达到峰值，第9天开始下降。所以腌制蔬菜一定要保证盐浓度高于15%，且腌制时间至少为20天。我国的国家标准中明确规定了酱腌菜中亚硝酸盐(以NaNO2计)含量不得超过20 mg/kg11。进行食品安全分析检测的样品对提取过程的要求相对比较严格，因为其直接影响到最终的检测结果是否达到国家标准。有关亚硝酸盐检测的前处理方法即提取过程，陈秋生、梁淑轩等人13已作了研究，他们选取黄瓜作为供试蔬菜，分别采用超声提取、振荡提取、水浴提取（国标提取）三种提取技术进行比较，建立了蔬菜中亚硝酸盐的超声提取方法。三种提取方法的具体做法分别是：国标提取法：国标提取法即水浴提取法，称取匀浆样品10.00g于250mL锥形瓶中，加入12.5mL饱和第2页（共18页）选题背景硼砂溶液，70水100mL热水，混匀，于沸水浴中加热15min，冷却至室温。然后将试样转入250mL容量瓶中，加入2mL亚铁氰化钾溶液和2mL质量分数为22%的乙酸锌溶液沉淀蛋白质定容，摇匀，静置10min后过滤，滤液待测。这是一种传统的提取方法，但该提取方法耗时长，回收率也仅为65%；振荡提取法：称取匀浆样品10.00g于250mL锥形瓶中，加入5mL饱和硼砂溶液，70纯水100mL，粉末状活性炭1g，置于振荡器上振荡30min。再将试样转移到250mL容量瓶中，加入2mL亚铁氰化钾溶液和2mL质量分数为22%的乙酸锌溶液沉淀蛋白质，定容，摇匀。静置10min后过滤，滤液待测。振荡提取法相对更为简单，一般对植物样品、食品，尤其是含水量较高的新鲜样品，如蔬菜、水果等使用时较为方便简单，不需要特设的设备，只需普通的振荡器。但振荡时间较长，回收率为78%；目前实验室使用较多的是以超声波清洗器作为提取仪器。一般在超声波提取之前应该将待提取样品用提取溶剂浸泡一段时间，使之相互充分的接触、渗透。在超声波提取中，最好都是使用混合提取溶剂，分步骤提取，以提高目标物的提取效率。具体步骤为：称取10.00g匀浆样品于250mL锥形瓶中，加入5mL饱和硼砂溶液，纯水100mL，粉末状活性炭1g，超声提取10min，然后将试样转入250mL容量瓶中，加入2mL亚铁氰化钾溶液和2mL质量分数为22%的乙酸锌溶液沉淀蛋白质，定容，摇匀。静置10min后过滤，滤液待测。超声波提取所需时间短且操作简便易行，回收率也较高，为98%。他们做出的实验结果表明：国标法提取的亚硝酸盐回收率最低，振荡提取法的亚硝酸盐回收率较低，而超声提取法的亚硝酸盐回收率很高，在98%以上，并且国标提取和振荡提取法所需时间均较长，而超声提取所需时间较短且操作简便易行。完成亚硝酸盐的提取后，紧接着便是对亚硝酸盐的一个检测工作。目前国内外定量测定食品中亚硝酸的方法主要有分光光度法、荧光法、催化光度法及离子色谱法。1. 紫外分光光度法紫外分光光度法测定亚硝酸盐，是人们关注的研究课题之一，探索不经任何分离而同时测定NO3-和NO2- 。NO2-在波长200240nm紫外区有特征吸收，亚硝酸盐氮的质量浓度小于 2 mg/L时，I dAdh I与浓度之间具有一定的线性关系，但 NO3-的存在对NO2-的紫外吸收会产生较大干扰，并且 NO3-的一阶导数谱图与 NO2-的一阶导数谱图也存在一定范围的叠合，对亚硝酸盐氮在紫外区的测定也会产生影响14。姚野梅等人15选用219 nm波长测定海水中的硝酸盐氮和亚硝酸盐氮的总量，另取一份试样加入一定量的氨基磺酸，破坏试液中的亚硝酸盐氮，再测定的结果仅是硝酸盐氮的含量，由总量减去硝酸盐氮的含量即为亚硝酸盐氮的含量。但该法灵敏度较低，含氮量小于0.02mg/L的水样，应采用其他更灵敏的方法；当含氮量大于6 mg/L时，不呈线性关系。阎保平等人16研究了用二元线性解析紫外吸收光度法，同时测定了NO3-和 NO2-，以导数光度法消除低频背景和高频噪声干扰。他们在pH值为58的条件下 测量波长192238 nm的吸光度，用线性解析导数技术处理，同时测定试样质量浓度为03.6 mg/L的NO3-和NO2-，所测定的相对标准偏差不大于5%，加标回收率为90.9111.1。方力等人17研究了硝酸盐及亚硝酸盐的紫外吸收光谱，利用基于BP算法的人工神经网络对光谱数据进行处理，同时测定水样中硝酸盐氮及亚硝酸盐氮，得取了满意的结果。王明等人18发现，在盐酸介质中，亚硝酸根与亚氨基二乙酸在溴化钾的催化下发生亚硝化反应，其亚硝化产物在近紫外区有吸收峰，最大吸收波长为350 nm，亚硝酸根为01 mg/L时符合比耳定律，其表观摩尔吸光系数为4.5×104L/(mol·cm)。李党生等人19研究了碱性品红与亚硝酸根在酸性介质中的反应，利用反应体系在波长265nm 的吸收，建立了测定亚硝酸根的新方法，线性范围为01.6 mg/L， 表观摩尔吸光系数为1.12×104L/(mol·cm)。由于该法计算较为复杂，因此，在实际中较少应用。2. 荧光光度法荧光光度法灵敏度高，近年来对荧光光度法测定NO2-的研究增多，在各种方法中，NO2-一般作为反应物或催化剂参加反应，所生成的产物将产生荧光或增强荧光信号的强度，而反应前后荧光信号的变化程度与水体中的NO2-含量成正比。李劲松等人20研究了亚硝酸和 L- 酪氨酸发生荧光反应的最佳条件，提出用 L- 酪氨酸为荧光剂来测定NO2-的新方法，其在含量为4200mg/L时与荧光强度呈第3页（共18页）选题背景第7页（共19页）选题背景线性关系，检出限为0.4 mg/L，该方法用于测定天然水中NO2-的含量，结果满意。方步武等人21采用硫酸磷钨酸去蛋白预处理的方法，以排除血红蛋白等对测定的干扰，以2，3-二氨基萘与亚硝酸盐反应生成荧光化合物，用荧光分光光度法测定，线性范围为 00.72 mol/L，检出限为24.27 nmol/L。杨景和等人22用硫酸肼作还原剂，研究了将NO3-还原为NO2-的条件，提出在水项中用DNA（2，3-二氨基萘）为荧光剂，测定 NO3-和NO2-的方法。该方法在含量为02 mg/L 时，NO2-与荧光强度呈线性关系，检出限为04 mg/L，能够测定天然水体中的NO3-和NO2-。3. 催化光度法自Montes R等人23使用溴酸钾作为氧化剂测定NO2-以来，从根本上改变了传统测量方法。催化光度法具有测定仪器简单、灵敏度高、检出限低等优点，结合必要的显色或褪色措施，对亚硝酸盐的测定下限可达pg级。催化光度法的原理是在一定介质中使用氧化剂来氧化有色染料，根据有色染料褪色的快慢来测定亚硝酸盐的含量。目前，溴酸钾成为催化光度法测定痕量亚硝酸根的主要氧化剂。但在溴酸钾为氧化剂的指示反应体系中，Br-，I-以及含硫的阴离子往往会干扰测定。郑肇生等人24首次提出以氯酸钾作为氧化剂测定NO2-的催化光度法。溶解氧作为氧化剂的方法十分少见，但是该方法选择性和灵敏度较好。袁君娉等人25提出在以氯化钠作底液的稀硫酸溶液中，NO2-催化硫酸亚铁与溶解氧的反应，生成Fe3+，产物 Fe3+与 SCN- 反应生成有色配合物，通过吸光光度法测定吸光度，从而间接地测定痕量 NO2-的含量。Liang B26对NO2-催化过氧化氢氧化氯丙嗪进行了研究。Mikuska P27研究了 NO2-催化过氧化氢氧化鲁米诺。催化光度法所使用的指示剂主要有偶氮染料、三苯甲烷类染料、对氮蒽染料及蒽醌类染料等。催化反应的反应温度从室温到100 各不相等，反应时间为360 min，停止反应的方法也各不相同（流水或冰水冷却，阻止剂终止等），其测定检出限一般为2.4×10-44×10-11g/L，测定范围为012 mg/L。该方法虽灵敏，但其条件不易准确控制，稳定性较差，选择性也不是很好，Br-，I-，SCN- 等仍有干扰，要想建立一个很完善的测定NO2-的催化光度法的体系，还需从其显色条件、终止反应的方法和干扰离子的消除等方面着手，同时应多探讨一下 NO2-的催化原理。4. 离子色谱法离子色谱法是同时测定多种阴离子的快速、灵敏、准确的分析手段，已用于对啤酒、白酒、蔬菜等样品中常见无机阴离子的测定。目前欧盟已将离子色谱法规定为肉制品中亚硝酸盐硝酸盐检测的标准方法。蔬菜、肉制品等样品中常常含有较多的Cl-，由于Cl-峰邻近NO2-，为防止在测定过程中高浓度 Cl-对低浓度NO2-的干扰，一般试样须经过Ag柱处理。而对于蛋白质含量较高的食品样品来讲，需使用体积分数为3%的乙酸预沉淀蛋白，处理后的试样中含有较高浓度的乙酸。为了使NO2-的分离检测不受其干扰，也必须对色谱分离条件进行优化。张磊等人28的检测结果表明，在氢氧化钾浓度为6 mmol/L的条件下，低浓度 NO2-可不受Ac-干扰，而获得良好的回收，同时可保证试样中Cl-与 NO2-的良好分 离。该方法的测定下限一般为0.1 mg/L。关翠林等人29报道，当碳酸氢钠浓度大3 mmol/L，或碳酸钠浓度大于4 mmol/L 时，亚硝酸盐容易受氯离子的干扰；当碳酸氢钠的浓度较小时，分析时间较长。因此，一般采用浓度为3 mmol/L碳酸氢钠和4 mmol/L碳酸钠的混合液为流动相，在此条件下，亚硝酸盐和硝酸盐在8 min内达到基线分离。离子色谱的检测器一般采用电导检测器，可检测样品中NO2-，Br-，NO3-；但 F-，Cl-，SO22-等共存离子存在干扰，尤其是 Cl-对NO2-检测的干扰最为严重。而紫外检测器为选择性检测器，对NO2-和NO3-有较好的选择性，可以获得比电导检测器更高的灵敏度。同时，紫外检测器对Cl-不灵敏，可以降低Cl-的干扰。逐渐发展起来的抑制型电导检测器随着新型抑制器的推出和完善，已能显著降低杂离子的干扰，提高待测离子的响应。张磊等人28将紫外检测器和电导检测器串联进行检测，结果表明，抑制型电导检测器与紫外检测器的测定结果无显著差异。另外，采用二极管阵列紫外检测法检测NO2-，Br-，NO3-，I-，在紫外区均有强吸收，干扰离子F-，Cl-，SO22-在紫外区均没有吸收，可以获得NO2-，Br-，NO2-在高浓度Cl-和SO22-条件下的信号。二极管阵列紫外测定法的灵敏度明显优于电导法，但二极管阵列检测器的价格较第5页（共18页）选题背景昂贵。5. 吸光光度法（国标法）测定亚硝酸盐的标准方法为盐酸萘乙二胺法，又称为格利斯试剂比色法。其原理是：在弱酸条件下，沉淀试样中的蛋白质并去除脂肪后，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化，再与盐酸萘乙二胺（或 a- 萘氨）偶合反应，以分光光度法测定其亚硝酸盐含量30。该法检测显色的程度及显色后的稳定性与实验的pH值有关，一般以1.93.0 为宜。试样在实验温度10 时放置 24 h，吸光度开始下降，30 显色后1 h，颜色开始变浅，一般显色温度1530 ，在2030 min 内比色为宜。该法检出限为5 g/L，亚硝酸盐氮质量浓度为10400 g/L 时，与吸光度呈良好的线性关系，可取得可靠结果31