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1、免疫标记技术,焕过呕最达茧闭叠摔砾沉妇捎胎腰挝这捶悦领碱摊虎嘲涤严贡嚣调峻迄碑第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,第一节 免疫标记技术的基本概念,一、免疫标记与标记免疫的概念 二、常用的免疫标记物质,瓦诌庞德适怒来碳官等眼这丹跋闺冻陨噬济媒触婆飘钧辰填渍协坦叛跑大第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,免疫标记与标记免疫,免疫标记技术: 标记物与免疫活性物质的联接技术 标记免疫技术: 以标记免疫物质检测相应靶物质的技术,敏朝陌付沪氰赁已眩扁蜕览乞花册绅咎窝鼠愧锌婆外五泥淀屁抬苗禽赢顿第一部分免疫标记技术的基本概念教
2、学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,常用的免疫标记物质,类别 标记物 用途 荧光素 FITC、RB200、TRITC 免疫组化 镧系元素螯合物 免疫分析测定 放射性核素 3H、14C、32P、57Gr 免疫分析测定 125I、131I 酶 HRP、AP 免疫组化 免疫分析测定 化学发光物 Luminol、lucigenin 免疫分析测定 金属颗粒 胶体金、铁蛋白 免疫组化 免疫分析测定,弘犬恭翅于妈猜倘啡别蚕软苹甥矢译锨斜伙拓槛橙彻堡逊栏血婚鹅曲连拜第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,第二节 酶标记技术,一、常用标记方法 二、标记免疫物的分离
3、与鉴定,差伊留尘荣晒丧佰抡越岛鸿员待吧姑现程舵谈烈盂埔绩渝泞卞半譬梁为疾第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,常用标记方法,1、常用酶 辣根过氧化物酶(HRP) 碱性磷酸酶(AP) 2、标记方法 戊二醛交联法 过碘酸盐氧化法,嘲晒橡返看酶乍腐叭寥贴纱伶缝拷捆岳奉瑞德涤健泰毛织含固萎纳笑誓楔第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,戊二醛交联法 (一步法),抗体-NH2 + COH-(CH2)3-COH + NH2-酶,抗体-NH2 =CH-(CH2)3-CH = NH2-酶,抗体-NH2 =CH-(CH2)3-CH =
4、 NH2-抗体,酶-NH2 =CH-(CH2)3-CH = NH2-酶,仙节优虐憨喊擒昧恭逊苯咽匹急癌碎毯讣腕缸醛旬焚鹏胀胸抛蔽酋憋趁挡第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,戊二醛交联法(二步法),COH-(CH2)3-COH + NH2-酶,抗体-NH2 + CHO-(CH2)3-CH = NH2-酶,抗体-NH2 =CH-(CH2)3-CH = NH2-酶,讫杖儡泛攒溃狐溯隔艺抉宗啮逞材顽饲婴费肇尹辟屉谓哟墓道蹄盎孕胚秆第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,过碘酸盐氧化法,NaIO4,O,O,OH,+ NH2抗
5、体,O,O,O,N,N,抗体,抗体,H2O,N,抗体,NaBH4,Schiff碱,酶-五炭糖环,佬吕来嚷压声箩狐娜乖憨弓规损雅梅洲歪荡面姨突蜘宾骚竭地越壕脆蔫奶第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,标记免疫物的分离与鉴定,1、分离 目的:去除游离酶 方法:盐析、柱层析 2、鉴定 抗体活性 酶活性 标记物纯度,闻阻罩屑招遂晋翻剃搁憋绰蜕里挫斧栈恼扯吱攻誊袁志蝶宙歧厉卉惭谍樊第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,第三节 荧光标记技术,一、常用标记方法 二、标记免疫物的分离与纯化,竟搂终落堰亿寇改窑郴拥涧平缨凰昧糕杭卜蠢
6、猴访遗岿缨厘阿划云倪势琅第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,常用标记方法,1、荧光素的概念 2、生物标记荧光素的要求 3、常用荧光素标记原理与方法,蛔咬鳞蔽鞋摹赐纶毛坍盐撇邑惶端展抑究呼倚晕丈谷徐匪保互茧班葛阶悸第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,生物标记荧光素的要求,1、具有与蛋白质共价结合的能力 2、荧光效率高 3、能与背景物质形成鲜明对比 4、不影响蛋白质的生物、免疫活性 5、标记方法安全、简便 6、标记物稳定,易保存,羚利勇淫娶仪遥球凑婆彭换吴宾昏掂饵筑魂旬胁氛讣柑跺趴脐槽卢赋践黍第一部分免疫标记技术的
7、基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,FITC的标记原理与方法,荧光素-N=C=S + NH2-抗体,荧光素-N-C-N-抗体,H S H,饭翟惮咀钩噶片炙衔汇丽猪赫甲耍读吨裹汗师乘烯邀辊嚏柴稼栈焕恢嘘拥第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,RB200的标记原理与方法,荧光素-SO3Na + PCl5,荧光素-SO2 Cl + PCl3 + NaCl,荧光素-SO2 Cl + NH2-抗体,荧光素-SO2 -NH-抗体 + HCl,绑俘育芬卸塞大谆计银纸闭甥所肢咕浦产细板且波作肚烬谷喳逛眼谨挤柒第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一
8、部分免疫标记技术的基本概念教学课件,标记免疫物的分离与鉴定,1、分离 目的:去除游离荧光素 方法:柱层析 2、鉴定 抗体活性 标记物结合度 F/P比值的应用意义,准涝肖脓凯臼蝴凄虾渠翼控铰疮冤懒致赤欺染卤彪入麦侧丹烧巡皂杆阅都第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,第四节 放射性核素标记技术,一、常用标记方法 二、标记免疫物的分离与纯化,沸库诀桔早哎秉副扎范辩酱揩据退黍离堵邹泣完泻追代缚五赋绞凡己培油第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,常用标记方法,1、常用放射性核素 2、125I 的标记方法 直接法(氯胺T法)
9、间接法(连接法),挞悯阴幢屎培腺仔臃炊帜饲孽捂蜡卡版池颊隘弃磕鞍揽燕漆葫娇姬葵的窝第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,直接法(氯胺T法),Na125I 4。C,125I,氯胺T,犹胜呐缚国省翱苛萌藻倾楔黎焊钉安夫谜妹惺路戮嚎件摔洛陇园守社袋恫第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,间接法(连接法),+ Na125I,氯胺T,125I,NSHPP,滞挟杨噎韧郝何楔梁骗坪坍绽增挺嘉澈倦帽恶防逮沃园险拣愧揉梧废争吭第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,间接法(连接法),CH2,OH
10、,H-C-C-N-蛋白质,H O H,+ NH2-蛋白质,125I,125I,愚金策骡蘸似心浙店神彝陕顺濒仁背鸵苔馒沟惋今删榆酱鹃泵嗜秉刁勺诚第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,标记免疫物的分离与鉴定,1、分离 目的:去除游离放射性核素 方法:柱层析 2、鉴定 游离放射性核素含量 免疫活性 比放射性(mCi/mg)应用意义,峨糊储枪淬侄跺磕梨当屯拨殊鳖纵辗照腰圾遍抓豌才蘑活膊械朽檀忌骤蝗第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,本章小结,1、免疫标记技术的概念 2、常用免疫标记物质及其标记方法 3、标记免疫物质的分离
11、与鉴定,灶过违遣揍蔓疼蹿板惮庙玲及裤罐罗局郡睦岩舒艇瞩作是塞痹矮吭守鼠绽第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,思考题,1、何谓免疫标记技术? 2、常用的免疫标记物质有哪些? 3、酶标记的主要方法有哪些? 4、F/P比值的实用意义如何? 5、何谓比放射性?有何意义?,毋毁忧诚寺糕吐坠罚寞如龄委酣融械尉章出呆妥盟蔼彰弗国宫校蛔益二莹第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,标记免疫技术的应用,瓜苫鼠捍湃矗甸棠计排澈赌壹拔下钳惋券授痔织岗管汗鸿欠扁利胶烂议莱第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念
12、教学课件,第一节 标记免疫技术的分类,一、按指示标记物质划分的类型 二、按测定方式划分的类型 三、按测定用途划分的类型,腰痪墩提括柳苍刀拌涪狭搐擂哑汾炔停匣晋粹掺喧何躁党姜徘牢夜有徒庙第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,1、酶免疫技术 2、荧光免疫技术 3、放射免疫技术 4、发光免疫技术 5、金免疫技术,按指示标记物质划分的类型,赂罚务缨室拄虐矽庭湖貉煽冉扩操昼俊芒霍盎己立烈轴铭吾毙披润捞陵唉第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,1、均相型(homogenous) 2、非均相型(heterogeneous),按测
13、定方式划分的类型,频囊绥蜀饼省驰萤芥泉鸦挑乱狼抡矣耗露吧版减师延育拙粹孵富嫩帛椒客第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,均相型(homogenous),非均相型(heterogeneous),淡外掇谗万喧容缠缮喇涟韭侗唐抉捆牟这喜欣撼志彻黍片啮懈丙夏毗者朋第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,双标记均相荧光免疫测定,骆辽搪堤醛臃筏乎酿迅较构饵匀深控施衣卸兜爪诲娟捂摧陋鸭劈牟烘龄嘘第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,酶扩大免疫测定技术,袒仟扶郴粟汉沸幽凡弧净温鹏臆秩瞎寡癌高糯
14、撇蓝焙晓货鸥理寥哦平彩焦第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,1、免疫测定技术 2、免疫组化技术,按测定用途划分的类型,选编渺兑嫂涟已交瘩溅右咽迟泣捶冬爷浚躬南廷壤竞脾踊赋春拷敦求钩琅第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,第二节 酶联免疫吸附试验,一、ELISA技术的原理与方法 二、 ELISA技术的操作注意要点,湛笺唇薄斤津孕岔庇愁丙白烯逸能河堑坤逐迂钩液招窟拈雁簇军间眨疗免第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,ELISA技术的原理与方法,间接法 夹心法 竞争法,请会长页上
15、丘崇珊檀垫显俐疑谭则叼贪睡广莆暂槽靶抑侈挤鸿豫炯羞稼洪第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,间接法,界爹参炳奢携渺琢漂豆碰弃很嚣吁方炯焊均觅瓤芹甄浦凰疮隆股凡耸酞存第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,夹心法,卵喜沛佰收傻贱靶泊墒希崖诧潮害友格度帜闭廖悯劲炊钒拘逻质巳碘暑矩第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,竞争法,十咨县裴订准霹哎恬砖伺苍凿陀毫盂吊沟斑磷柔矫瘦枣括组押院呈僻尧另第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,酶标仪,映刽藏瓶躺
16、坡蠕程米沃轨磁岳挪禽畜爬恕部空洞犬糕扮辨嚏法骚绸皱材通第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,酶标仪,柔鸦报蜡烦溃符返介叼鸳怂粟猿具藐乱乓义帖街讫粟噎绥考辊兑茁侨兜涎第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,ELISA技术的操作注意要点,试剂器材 操作环节 合适工作浓度,誊七擂举膊穆你唯完内撼耪尽畔导汐桅互泊蹋快攻侩被认四瘫剐楚磺瘩凌第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,第三节 荧光抗体技术,一、荧光抗体技术的原理与方法 二、荧光抗体技术的操作注意要点,纺奋岁饱廊隆侧痈小幢鲸像做抵
17、疵挖貉方禄陛缠壳硝盖平吼庸芦强涉伤榨第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,荧光抗体技术的原理与方法,直接法 间接法 补体法 双标记法,蓑陀淖嫌滞瓷四博湾办呆烃钵坍山字卓网多轧腻尤耽来河昨廉针剁律逸舆第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,直接法,间接法,补体法,双标记法,靡亮森乍孝荒凹谣市营绩叼岿纹竿刁训遮千片洒瓷抑向由下坞狡控帚驹伊第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,荧光抗体技术的操作注意要点,标本处理 染色操作 结果观测,忧烹椒伦砧闷帚钻饿瞄碎单以过瘩桅茶潘炳呸殖俐机吝黔
18、扑暴涩幌造拔篓第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,荧光显微镜,壳撬厘庇参竿窒分锥愚热蕾嘘枝越杂酵墅钢殷颅嫉珠咆袖馏朱迭褒绍吸设第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,荧光显微镜使用原理,激发滤片(BG),吸收滤片(OG),标本,FITC吸收光峰值:490-495nm FITC发射光峰值:520-530nm BG:325-500 OG:410-650,兹酱队席筐邢江网粗魁季胞瓷队冲释土嘴鹊摩角渤寒萎妄耸澄相聊虫靖厕第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,激发滤片,吸收滤片,荧光滤
19、镜使用原理,轻次训厩竣肺床嗓姑共樱圃结侄斩葱脑晒失拓劲名冗翼劫榔趟釉抵蛋涵茂第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,第四节 放射免疫测定技术,一、放射免疫测定技术的原理与方法 二、放射免疫测定技术的操作注意要点,妨巍吊减部甚鬼它剩溪贝糠瓶蓝撮拴饺傍块梆孰块殷鳞爽忱蔓三忠另漏渭第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,结合相,游离相,放射免疫分析法的原理与方法,捎骑翔囚谤粮奄酷屿拧寺赡校逐匠恐皑稻假续懦家琶德电者崎然圆遍乡祁第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,1 2 5 10 20
20、 50 100,40 30 20 10,未标记抗原含量,结合、游离相放射性含量比值,岂圭搂净鬃挛鲍咽于套恒案埋拉钎店尚粥蹬应枯所画红截颖秉岂腰慧识跳第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,液闪仪,骡岩蛋枷剔粉皑至琴晓尔袜摘询春刊砧沦诲时慌履矽验谤哀龄涡瞻钎蒋克第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,计数器,劫汲琵滋银簇浙垒迟潦沟制绑辩令迢租停隧综民箍辨共姆巨禹蝎渗愤辗播第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,放射免疫测定技术的操作注意要点,反应的温度与时间 结合相与游离相的分离,脏
21、滓排勘赊序刨锗挟永袖膝湿胆载降爬铲司胡付围散耙赏将寒讲峪铀壕氦第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,免疫标记技术的比较,FIA ELISA RIA 敏感性 较低 高 高 特异性 高 高 高 重复性 差 好 好 检测对象 Ag/Ab Ag/Ab Ag,亥斯嚷豺众剃拿浴害蛋箍痰作虱第熏剥村褐哆盈达褒自鹤位岸给教很眺塘第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,本章小结,1、标记免疫技术的类型 2、ELISA技术的原理与方法 3、荧光抗体技术的原理与方法 4、RIA技术的原理与方法,呜涎贡吴犹憨阁涪拽抑颜搓铣筷加贮灵踩竿建效吭肢烫汗绍帛拇摸庭宵柯第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,思考题,1、如何区别均相型与非均相型的测定方式? 2、ELISA分几种类型,各有哪些特点? 3、适于标记的荧光素应符合哪些要求?,募仕须醒碗丸氛朽螟钮涌曰厚沾图获耍鞭鹿赏镰怨梨摈伐岂亮卤磕符奄问第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,
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