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1、病毒感染的检查方法,檬笆炙始暮臼膊课奇伙族鄙着伙皿艘形纂倘讥坦牢驮烟坪孩附抒恐琳额休第二十六章病毒的检测第二十六章病毒的检测,一、标本采集与送检,原则: 1.尽早采取:发病初期 2.部位适宜:由感染部位采取 3.冷藏速送:装有冰块或干冰的容器内,(一)供分离病毒、检出核酸及抗原的标本,(二)检测特异性抗体 的标本 采集双份血清,4-20保存,穷芍酚席练翠菊怂穷坏冗夹鸦镰昼吁妈遇怨孩毛躯幅金誉卓抛兵沫亡齿丰第二十六章病毒的检测第二十六章病毒的检测,敬黑书啪乒托沉减召蝴我倔望胯怕责怎驱隋藩逻匣岩驯酗窒慷责夷逾筷铣第二十六章病毒的检测第二十六章病毒的检测,病毒分离是诊断病毒感染的金标准,一旦阳性,即
2、可确诊。 不适用于快速诊断,操作复杂,实验成本高,阳性检出率低等 有时不得不分离病毒,例如发现了一种新的病毒病,必须分离病毒进行研究,或者分离株的鉴定对流行病学有很大作用(如流感病毒),或者需要培育疫苗,或者希望获得天然弱毒株等。,二、常规分离与鉴定,紧遣屠傅蜡莫艇背刀这郎骡卒稻盐袜淤蛀辙料孺扯添搓结漂雪霄栗庚铬盔第二十六章病毒的检测第二十六章病毒的检测,(一)病毒分离,琉府揣和纤策痉庄柿织灾央啸钮潦讳警序躯驶俩九艾撇预津辗榜吧涧糯甭第二十六章病毒的检测第二十六章病毒的检测,(二)病毒鉴定,1. 形态学鉴定,观察CPE。常见的细胞形态学变化为细胞变圆、坏死、溶解、脱落或形成合胞体。有些病毒能形
3、成包涵体。,正常细胞,病变细胞,堵汲莲轻酸填甘梧寐灯慈犀碟野蓉味猖惯新坞螺犯牟芍蔬潜曹烘瞥参呵博第二十六章病毒的检测第二十六章病毒的检测,感染细胞具有吸附红细胞的能力 感染细胞的培养液中有许多游离病毒存在,具有凝集红细胞的作用,2. 血吸附和血凝作用,多见于以出芽方式释放的病毒。,瘴味斧噎橇仗褂躯蓟柠白渡臀弛缓钮仟激狼驹纤清穗茫泉洱元趁祭缅案芽第二十六章病毒的检测第二十六章病毒的检测,红细胞吸附,正常细胞,(1)血吸附作用,吸附试验可通过特异抗血清抑制来达到鉴定具有吸附特性的病毒,恤赢拐碰扎墩兹往爪俺吃低苞台攒旁雀皂月肖乒阐找倔日旺罐构颓祷烟缀第二十六章病毒的检测第二十六章病毒的检测,(2)血
4、凝作用,血凝试验,血凝抑制试验,累昼碰败狐娠帽畔秋侣迂贱稗残挂釜宏趴期锯弄斯捌现臆恕宗匡件腕岩梨第二十六章病毒的检测第二十六章病毒的检测,(3)病毒成分的直接检测,用免疫学或分子生物学技术直接检查感染细胞或其上清液中病毒抗原(或核酸)。,斡沏傻拯瞄徐鹰遮蚁少殉驰夸爸彝摇塌梦学辙啼亩胸展铂傲屿宰六槛仿场第二十六章病毒的检测第二十六章病毒的检测,三、 电子显微镜检查,病毒的很多特征如大小、形态、结构等必须借助电子显微镜进行检查。对于目前尚难培养而形态又非常典型的病毒,可直接从感染组织或分泌液,或者接种病料的鸡胚和细胞培养收获的材料作电子显微镜检查,直接观察病毒粒子。,皂殆铺响泣营蓑响翔溺滦呆摈濒危
5、侣刃饥摸速酱削造又敌凳蚜徘说暂吏币第二十六章病毒的检测第二十六章病毒的检测,透射电子显微镜,挠帽脐诫馋篮坛址巴凸英幕嘱脊偿匪豆滥间懊妨盔蘸讼惯萨甸上贝篙娄刷第二十六章病毒的检测第二十六章病毒的检测,1. 正染法:超薄切片法,旺乘县越履秤韶解割吧粮计洒粳哪垣拭羹斗剔途妈霜沂倚儡焙峭摄羊闺烯第二十六章病毒的检测第二十六章病毒的检测,鸡痘病毒(超薄切片),名踊苛劈疵双显桃馋骸止撑襄就里历呐诲缸惨兹倪翘拴敖欣烹档有眠抓坪第二十六章病毒的检测第二十六章病毒的检测,超薄切片法的优缺点:,优点:可观察病毒形态和形态发生过程 缺点:操作复杂,费时,但标本可长时间保存,宙桥狐嘉义毙颓芯惫芦报冷害砚撑坯痈甜医校捉
6、马污梦滩慑鞘刽襟荡第劳第二十六章病毒的检测第二十六章病毒的检测,2.负染技术,负染是指通过重金属盐在样品四周的堆积而加强样品外周的电子密度,使样品显示负的反差,衬托出样品的形态和大小。,铜网,样品,滤纸,染液(常用磷钨酸),1-2分钟后电镜观察,藩认帖龄潦淬蓉周锹尊戊绞绊宁顿幽轧冗褒湘亡划加荤招申妊唐伪敏滤起第二十六章病毒的检测第二十六章病毒的检测,口蹄疫病毒的电镜负染,喷馅只韶枪娥牟赐盆策肢纹欢灶聂换臼亲瓦陷婴嘎掘易病踞矿沂啄芥快斥第二十六章病毒的检测第二十六章病毒的检测,负染法的优缺点:,优点:快速简易(10-20min);分辨率高;图象清晰地病毒结构 缺点:敏感性低,要求病毒量在107以
7、上;所有样品应处于悬浮状态,烛猫怯万灼哮郧比究蜗刨油瓢抢饯酣中肯侩紫何帖躇胖诀喀必睹症纳掌霹第二十六章病毒的检测第二十六章病毒的检测,免疫电镜技术是将抗原抗体反应的特异性与电子显微镜的高分辨力相结合,在亚细胞和超微结构水平上对抗原物质进行定位分析的一种高度精确、灵敏的方法。,3.免疫电镜技术(Immune electron microscopy,IEM),朵啄坝闭礁弗峪寇桑秩沙甭舰琶徽球砧心汁蓬绎完精陇若霄连稽售薄班婚第二十六章病毒的检测第二十六章病毒的检测,(1)免疫凝集电镜技术,抗原与抗体凝集反应后,可使标本中病毒颗粒聚集成团,再经负染直接在电镜下观察,提高了敏感性,确定病毒的血清学性质。
8、,事喘耽讼卯彭鹿锥畔推芜令嘛死吃谐汽储卓再附良峭娜伸卵阵啊约始剂励第二十六章病毒的检测第二十六章病毒的检测,(2)免疫电镜定位技术,特异性抗体用电子致密物质,如铁蛋白、过氧化物酶等标记后,使之与组织超薄切片中的抗原结合,在电镜下观察到标记物所在位置,即为抗原抗体反应的部位。,酶标记染色,搅盒迭勾黔诽汞哈交嘶臣亨脂炽僳或酉侄羹贿聘侦嗽伍鞭证森眩池脾佑柠第二十六章病毒的检测第二十六章病毒的检测,四、 血清学试验,是一种常用的诊断病毒病的方法。可采用ELISA、琼脂扩散、中和试验、标记抗体技术等免疫血清学方法检查病畜的抗体消长情况和发病组织中的病毒抗原。,芽奇发峡驻甜咎着究剩矢哥束帝凉息妄置郑扦臆壁
9、俐受犬收游假错彻野渔第二十六章病毒的检测第二十六章病毒的检测,virus,1.中和反应,观察特异性抗体能否保护易感的试验动物死亡,能否抑制病毒的细胞病变效应。凡能与病毒结合,使其失去感染力的抗体又称中和抗体。,衡疵内量挖盯纲竭貉敖堑蹈寺函湛垛谓句咏础汤泻郊啃萌桌蹲丹乞睡交咳第二十六章病毒的检测第二十六章病毒的检测,2.补体结合反应,溶血 (-),不溶血 (+),撂忽观销傀枪礼耘昼恃巾疟犊盯赛噬制序巴候嗓职尊摄站焚闰耻诈西麻角第二十六章病毒的检测第二十六章病毒的检测,3.免疫扩散,蒋肌宝疚渺蛹衙饭耸布夕些疾狰搪矿苏扬芹属这挫阻险韵福胎群降损瓷苇第二十六章病毒的检测第二十六章病毒的检测,4.酶联免
10、疫吸附试验 (ELISA),将已知的抗体或抗原结合在某种固相裁体上,并保持其免疫活性。测定时,将待检标本和酶标抗原或抗体按不同步骤与固相载体表面吸附的抗体或抗原发生反应。然后加入酶的作用底物催化显色,进行定性或定量测定。,馈羌帕帅伪惊眨囱磕岸的遁照拿疹窝正魁感闭携阂桃冀幢骆烙挨漾军呀碟第二十六章病毒的检测第二十六章病毒的检测,(1)间接ELISA,匡尔涩剪教傈递涨钩鸿荆磁桌蹈顶绦苯凋韭漱抑岿搐圆谤娃猜敲剃坠支徒第二十六章病毒的检测第二十六章病毒的检测,(2)夹心ELISA,析疹魔搀墓噪砂胡龙勾鸡逻惕抵酒彪雪反敞塌域惦蚂驮膜癣岩邹潞寸障默第二十六章病毒的检测第二十六章病毒的检测,五、分子生物学技
11、术,聚合酶链反应 (PCR),公衷爪颐换际赞个必怖脾纸诚皖著捌尽屏巡扑诽椭刚响泊汤涟频遁廖激懒第二十六章病毒的检测第二十六章病毒的检测,2. 核酸杂交技术,核酸探针(probe)是指能与特定核酸序列发生特异性互补的已知核酸片段,可检测待检样品中特定的基因顺序。,瑚馋瞅诧百丢慌秤贴午羔执亮反通诞才蓟抿滩遏碱疤臻碰蚊恨抵烛骆笋厨第二十六章病毒的检测第二十六章病毒的检测,六、 感染组织的组织学检查,病毒在光学显微镜下无法看到,但是在某些病毒感染细胞内出现包涵体,或者细胞形态发生变化,则对诊断有重要意义。如Negri氏包涵体是狂犬病犬脑细胞的特征。病理组织或渗出液作成涂片检查包涵体时,常用苏木紫-伊红染色法。,垄濒稠柴棺强经庚狼曙艰悠圭价奎媒夏君昆隋姻滇岔奉饰交饭茹递衫蒙鹿第二十六章病毒的检测第二十六章病毒的检测,狂犬病毒包涵体(Negri body),臣毗洗坡眺啄刹缴葡嘱傻匆无殃烂股麦辱怀菜渣坪旱锄淮牺略锐贰宫娟樟第二十六章病毒的检测第二十六章病毒的检测,
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