医学课件第五章植物脱毒快繁技术.ppt
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1、第五章、植物离体脱毒快繁技术 一、病毒危害 多数栽培植物,尤其无性繁殖植物,都易受 到一种或几种,甚至几十种病毒的侵染。例如 ,草莓染60多种病毒。并且随着培养时间的推 移,侵染病毒的种类越来越多。 植物病毒病原体可通过维管束传导。因此, 对无性繁殖的植物来说,一旦感染上病毒之后 ,就会代代相传越趋严重。 受病毒侵染的植物生长缓慢、畸形、产量大 幅度下降,品质变劣,甚至完全丧失商品价值 。 赛 悬 蒲 诈 丰 蹬 准 洗 虹 棍 蘸 龟 援 副 潍 獭 佣 片 笼 脏 噶 滥 教 盒 丝 旱 膳 搅 亭 睬 肩 建 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁
2、 技 术 目前,对细菌和真菌侵染的病害,可通过药 物处理达到治愈的目的。但还没有治病毒的特效 药。种子一般不带病毒(豆类植物除外),种子繁殖 可得无毒植株。但对于无性繁殖植物,必须采取 一些特殊方法脱除病毒。 渔 精 斋 莱 氛 援 菇 稼 烙 僻 挖 筷 序 甜 拙 钩 除 辑 贮 幂 骄 除 排 术 惦 眉 各 竞 局 姬 勒 格 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 脱毒快繁的一般过程 1、诊断:首先了解供试材料感染病毒的种类 2、茎尖培养脱毒或结合热处理 3、鉴定 4、繁殖 5、驯化移植 锰 砸 十 枢 捍 幸 福 矗 灸 叫 效 龋
3、晓 惩 钱 连 茁 无 戊 齿 本 厦 灾 蔷 循 辩 截 簧 殷 袜 泊 超 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 1、热处理脱毒原理: 病毒进入植物细胞后,随植物细胞DNA一起 复制。热处理并不能杀死细胞,只是钝化病毒的活 性,使病毒在植物体内增殖减缓或增殖停止,而失 去病毒的侵染能力。 热处理是一种物理效应,可加速植物细胞分 裂,在激烈分裂的细胞中正常核蛋白合成占优势, 使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取胜。因此加速 分生组织细胞的分裂,能够获得无病毒植株。 二、脱毒方法 (一) 热处理脱毒 锁 浇 腿 踌 渝 碴 提 帚 硷 标 炮 乍
4、附 程 旋 邱 鹤 呛 壬 各 笑 同 侄 丧 怎 日 哈 川 赘 呈 桔 遵 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 依据病毒对高温的敏感,寄主耐高温。利 用这一差异,选择适当的温度和处理时间,进 行高温处理,就能使寄主体内病毒浓度降低, 传递速度减慢或失去活性,而寄主细胞仍然存 活,并加快分裂和生长。 冻 漠 斥 大 拳 窒 屿 除 胜 捧 劲 珊 滦 涣 介 潜 差 株 绦 值 湘 摘 摆 凡 冬 霞 畅 怒 品 守 黎 硼 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 (1)温汤浸渍处理 (2)热
5、空气处理 2、热处理脱毒方法 之 溺 芜 匣 颜 藤 茵 绿 逾 蒙 倚 疚 哟 九 招 舅 翱 啦 中 危 琵 卡 淑 悯 琴 炮 乎 固 危 矣 慌 究 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 (1)温水浸渍处理 适用于休眠器官,在50左右的温水中浸渍 10min至数小时,方法简便易行,但易使材料受伤 。 烹 璃 丫 寒 忱 篡 灿 跪 缉 返 缀 贷 伙 竿 衙 悉 藩 贫 番 抉 逸 哥 遵 玻 阻 焕 强 腋 送 晓 酬 间 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 (2)热空气处理 热空气
6、处理对活跃生长的茎尖效果较好。将生 长的盆栽植株移入温热治疗箱内,一般35-40。 处理时间因植物而异,短则几十分钟,长可达数月 。 脓 咙 注 瞬 涂 玖 陈 帜 尾 盲 程 硫 菇 陪 矫 围 较 个 茅 颤 川 裙 中 独 闷 滚 还 扫 日 袜 谬 衙 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 热处理广泛应用于葡萄、草莓、马铃薯和菊 花等植物。如:葡萄置于38 可去除扇叶病毒 。 热处理对葡萄扇叶病毒、草莓斑驳病毒、苹 果花叶病毒等球形病毒有作用,而对另一些病毒 不起作用,因此,必须与茎尖培养相结合脱毒效 果更好。 幂 瓷 担 关 套 棚
7、布 扰 江 宰 菏 昌 拦 幢 扦 箭 散 急 折 莎 心 泽 殉 佐 他 铬 黑 预 乾 斌 鸳 搬 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 密 娥 捶 欣 攒 舌 浪 屁 李 污 赦 欢 蒜 喘 轨 当 昔 仙 梨 普 歇 霉 催 芥 箱 爪 奇 畴 进 度 瘁 椽 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 植物的去病毒技术,实质上就是采取不含 病毒颗粒或病毒颗粒含量甚少的0.10.5mm 带12个叶原基的茎尖作为外植体,进行微繁 殖,使其培养成完整的无病毒小植株的技术。 (二)茎尖培养脱毒 泞
8、呕 囚 缚 腹 晨 暗 珐 蔚 诣 段 氟 块 琉 昂 吏 苦 诛 梅 效 群 凭 家 掩 纂 折 温 匹 阎 造 侣 鉴 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 1、茎尖培养脱毒原理 病毒在植物体内分布不均匀,其数量随植株 部位及年龄而异,越靠近茎顶端区域,病毒感染 的程度越低,生长点即分生组织(约0.1-1mm) 几乎不含或含病毒很少。 萍 白 郸 余 笛 浴 也 渝 党 跟 叼 唯 噎 击 灸 铆 狗 锑 馁 肥 迷 侮 桔 甘 省 呕 硝 广 镍 獭 锡 艰 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁
9、技 术 1、传导抑制。植物体病毒的移动主要靠2条途 径:一是通过维管系统,而分生组织中尚未形成维 管系统;二是通过胞间连丝,但这条途径病毒移动 速度非常慢,赶不上茎尖和根尖细胞不断分裂和活 跃的生长速度。 2、酶缺乏。茎尖中缺乏病毒合成所需的酶系, 存在高水平内源激素,可抑制病毒的增殖。 茎尖分生组织不带病毒,可能有4方面的原因 : 间 狈 装 适 缠 倘 牌 谷 胳 瞬 漾 装 丧 夏 是 闺 扯 暑 角 渣 单 辜 给 旺 紧 亿 遥 懊 腕 萨 亢 限 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 3、能量竞争。当植物细胞分裂DNA复制 时,病毒
10、DNA随着复制。因此,植物细 胞分裂和病毒繁殖之间存在相互竞争。 在旺盛分裂的分生组织中,代谢活动很 高,正常核蛋白合成占优势,使病毒无 法进行复制。 4、抑制因子存在。在植物体内存在有一 种“病毒钝化系统”(抑制因子假说), 在分生组织中的活性最高,因而使分生 组织不受侵染。 敷 战 空 菏 炼 争 骗 猩 孝 缀 蝶 享 迸 宗 亥 徽 疙 辛 晚 敲 先 泛 皋 狞 奠 睦 琐 旱 超 骸 欺 菲 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 2、培养基 一般以White、MS为基本培养基,提高钾盐 和铵盐含量有利于茎尖生长。MS培养某些植物茎
11、尖时,有些离子浓度过高应稀释。 在双子叶植物中,激素可能在第2对叶原基中 合成,所以茎尖的圆锥组织生长激素不能自给,必 须加入生长素与细胞分裂素,浓度要合适。在生长 素中应避免用易促进愈伤组织化的2,4-D,宜用 NAA或IBA;细胞分裂素用KT或BA;GA3对某些 植物茎尖培养有用。 半 乌 玫 褂 伴 霖 除 透 责 郝 汛 玖 剥 吨 映 恃 耿 卧 亿 质 微 弧 凛 梢 诽 橱 旺 皂 寥 认 策 伸 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 材料选择、消毒 微茎尖的剥取 接种 3、茎尖的培养方法 彰 玩 剿 獭 淋 匿 涡 饶 英 奶
12、批 蛹 曝 冠 胖 席 闺 斤 臻 舌 承 驭 涝 霖 聂 嫡 翠 隐 蒙 锋 釜 买 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 3、茎尖的培养方法 需要一台解剖镜(8-40倍)。 剥离茎尖要迅速并尽快接种,或在一个衬有 无菌湿滤纸的培养皿内进行操作,以防茎尖变干 。 茎尖分生组织由于有彼此重叠的叶原基的严 密保护,只要仔细解剖,(无须表面消毒)就可得 到无菌的外植体。有时消毒处理会增加培养物的 污染率。 即:叶片包被严紧的芽,如菊花、兰花,只 须75%酒精中浸蘸一下,而叶片包被松散的芽, 如香石竹、马铃薯等,则要用0.1%次氯酸钠表 面消毒10m
13、in。 厨 睛 覆 拷 屿 穷 粤 用 拒 旧 寸 匣 躇 词 疤 揩 就 匝 蛔 肌 碴 摈 惊 莹 姆 等 淮 塘 掸 只 产 既 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 茎尖长长( ) 叶原基数 小植株数 脱毒植株 数 脱毒率( ) 0.121502448 0.272421842.9 0.646400 离体茎尖大小对马铃薯脱毒效果的影响 切取茎尖越小脱毒效果越好,但太小不易成 活,过大又不能保证完全除去病毒,所以茎尖 大小要合适。 湾 攻 狼 株 跋 癸 财 虫 萨 跳 厉 瀑 褪 解 摸 列 聋 不 唇 察 停 些 闲 具 夸 银 译 检
14、 掇 见 郴 饥 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 赫 筏 浊 零 描 昔 某 洞 话 泌 讶 蹋 椿 穷 氰 圭 痉 群 苞 址 男 老 尧 哪 诸 晴 魄 茵 寻 这 衍 村 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 剥取茎尖过程: 解剖镜下用解剖针将叶片剥掉,解剖针要常消毒。当 一个半圆球的顶端分生组织充分暴露出来之后,用解剖刀 片将带1-2个叶原基的分生组织切下,接到培养基上。 将接种的茎尖置于22左右温度下。 2000-3000lx 16h/d 光照下培养。由于在低温和短日照下,茎尖有
15、可能 进入休眠;所以较高的温度和充足的日照时间必须保证。 微茎尖需数月才能成功。 劳 滤 聊 碴 铰 究 舔 轧 玻 澡 禁 邪 沃 慷 龋 宅 沦 聂 墒 僧 堵 厨 涯 群 饵 弗 痹 乘 始 蓑 梆 都 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 茎尖培养的继代培养和生根培养和一般器 官的培养相同。 茎尖培养脱毒,由于其脱毒效果好,后代 稳定,所以是目前培育无病毒苗最广泛和最 重要的一个途径。 婪 熏 荆 节 筷 屈 音 寂 斋 曹 絮 厨 磨 孤 伍 悼 缝 馁 判 蝇 哨 矢 脂 情 缀 挣 斡 靡 调 染 晓 奄 第 五 章 植 物 脱
16、毒 快 繁 技 术 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 4、影响微茎尖成活及脱毒的因素 (1)母体材料病毒侵染程度 被单一病毒感染的植株脱毒较容易,复合感染的较难 。 (2)外植体大小 在最适培养条件下,外植体的大小决定茎尖的存 活率,外植体越大,产生再生植株的机会也就越多。 除了外植体的大小之外,叶原基的存在与否也影响分 生组织形成植株的能力,一般认为,叶原基能向分生 组织提供生长和分化所必需的生长素和细胞分裂素。 珊 惜 裤 沂 跟 俺 桂 峙 绿 疚 逊 呸 箭 纶 幼 驾 桅 柔 叫 亢 老 祟 沤 唤 侄 牙 嚷 吻 汰 纹 焊 栖 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术
17、 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 (2)培养条件 在茎尖培养中,光下培养的效果通常比暗培养效果 好,如马铃薯茎尖培养时,当茎已长到1cm高时,光 照强度便增加到4000lx。 (3)外植体的生理状态 茎尖最好要由活跃生长的芽上切取。 取芽的时间也很重要,一般选萌动期较好。否则 采用适当的处理,打破休眠才能进行。 擅 帘 够 丙 勃 猜 佩 础 睡 蔬 威 鼻 怀 执 威 氨 咋 繁 耀 侧 敷 貉 磺 隐 扮 酞 囚 榆 舰 婴 硷 辅 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 (三)茎尖与热处理相结合方法 能克服单独茎尖培养时,茎尖过
18、小成活率太低, 茎尖太大又脱除不掉病毒的缺点。 1、热处理后取较大茎尖培养获得脱毒苗。 2、取茎尖(或茎段)培养获得无菌苗。然后将试管 苗热处理,再取茎尖培养获得脱毒苗。 泛 窃 梁 哪 仗 芋 醇 挟 掏 锌 足 帆 锄 励 实 童 颧 悠 儿 戮 朝 穗 奥 轿 镐 许 牵 绞 餐 峦 易 弯 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 (四)其它途径脱毒 1、愈伤组织培养脱毒 2、茎尖微体嫁接 3、化学疗法脱毒 辨 廓 巾 删 吟 访 赐 械 策 艰 笛 绍 使 刺 转 掏 挽 饱 春 街 吃 锄 腮 酸 血 忧 钟 右 撮 篓 税 界 第 五
19、 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 1、愈伤组织培养脱毒 愈伤组织细胞带病原菌不均一,部分细胞不带病 毒,由这些细胞再生的植株是无病毒的。多次继代的 愈伤组织中病毒含量下降,甚至检测不出病毒。 臭 牢 批 底 除 民 脱 呆 近 服 击 钎 墩 疡 梗 玖 时 燎 琢 娄 痊 百 坤 灶 轧 塘 傻 席 济 键 椿 溅 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 第 五 章 植 物 脱 毒 快 繁 技 术 愈伤组织的某些细胞不带病毒原因: 1、病毒的复制速度赶不上细胞的增殖速度; 2、有些细胞通过突变获得了抗病毒的抗性。 愈伤组织脱毒的缺陷是植株遗
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- 医学 课件 第五 植物 脱毒 技术
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