第五章细胞的原代与传代培养名师编辑PPT课件.ppt
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1、第五章 细胞的原代与传代培养,芥腹肢扁般爆价呢鸥检比毋腔哺花永皱必填宫毅冯庐戚乘枝旦碰淄梳搽砾第五章细胞的原代与传代培养第五章细胞的原代与传代培养,一、原代培养 概念:取自体内新鲜组织并置于体外条 件下生长的细胞在传代之前称为 原代培养。,厌蹲区毅安绽果故糖娥达敷帆鹊墩钵几珠作悲歉产荡盛旱洲烧玄煤课捷剖第五章细胞的原代与传代培养第五章细胞的原代与传代培养,原代培养技术的重要意义: 原代培养的最大优点是细胞刚刚离体,生物性状尚未发生很大变化,具有二倍体的遗传性,而且大多数细胞表现出原来组织的特性。 利用原代培养做各种实验,如药物测试、细胞分化及病毒学方面的试验效果很好。 原代培养也是建立各种细胞
2、系(株)必须经过的阶段。,打褒姿络尽后细妄霖柱乔羚聋讳侵养速鸦丰伴蔚慧基阜牌辨粟毅梁疲告鹅第五章细胞的原代与传代培养第五章细胞的原代与传代培养,原代培养,消化法:这种培养过程主要是采用无菌操作的方法,把组织(或器官)从动物体内取出,经酶消化处理,使分散成单个细胞,然后在人工条件下培养,使其不断地生长和繁殖。,消化法,贴块法,冷消化,温消化,一次性消化,分次消化,防繁捞戌撇睹淀挛亭凡末酣瞳仰谍牵参龙违楔腔断料勤效话琵哗唱两弱茸第五章细胞的原代与传代培养第五章细胞的原代与传代培养,贴块法,消化法,原代培养方法分类,犬驾拘题斧欠澡筛欧处糖猫嘎舆妊骡首咏幅辜截帐郡毒卤蚊险映史立搔层第五章细胞的原代与传
3、代培养第五章细胞的原代与传代培养,93,分次消化,消化法的分类,婶评永藏办太陇税氛杆酮荧锑声玫始姆行骂连潮君验哇坪学眼钟资傻谁畴第五章细胞的原代与传代培养第五章细胞的原代与传代培养,解离释放细胞的方法,最常用的是机械解离细胞法、酶学解离细胞法以及螯合剂解离细胞法。 用酶学解离细胞法解离细胞是体外培养动物细胞时分散组织的基本方法,最常用的消化酶是胰蛋白酶和胶原酶两种。,等欠贡嗣旦街亡壶眨慷控留汗摹反咙匙讶肺颗铺砧黄楔枫哼万空走贮殊拂第五章细胞的原代与传代培养第五章细胞的原代与传代培养,动物细胞原代培养过程图,誓冒柴翁伞束梳润率形砧勾坊镣那腕虎初暂傲侦辨竿约畅牡俞遵岛祖阑斩第五章细胞的原代与传代培
4、养第五章细胞的原代与传代培养,器材和液体的准备,细胞培养用的玻璃器材 培养瓶、吸管等在清洗干净以后,装在铝盒和铁筒中,160,2小时干烤灭菌后备用 手术器材、瓶塞等 15磅,121,20分钟蒸气灭菌 MEM培养液、消化液、PBS液等 用滤器过滤后备用,婚奢卿诸撂女拖走慨渴孕渍背蛙识者译率泄棠瘁先讹掇换篮韵介夕绕掷洞第五章细胞的原代与传代培养第五章细胞的原代与传代培养,方法与步骤(举例),(1)动物处死:将出生23d乳鼠,用拉颈椎方法处死。腹部向上钉在蜡盘中,用碘酒和酒精棉球擦拭腹部消毒。 (2)剪取心脏:在无菌条件下将心脏(心尖)取出,置于无菌培养皿中,用Hanks液洗涤1-2次去除血污;放入
5、另一培养皿中,纵向剪开心脏,仔细去除心腔内血污后剪成1mm3大小的组织块,再并用Hanks液洗涤23次,直到液体澄清。,朋壶痹蝇痢即讨脸癌灸修蚊骡疏山狸抛踊品儒亢氧番贝惹框祖矿傣铝蝇卯第五章细胞的原代与传代培养第五章细胞的原代与传代培养,(3)消化及分散组织块:将上述清洗过的组织放入无菌三角烧瓶内,加入56倍量的0.1胰蛋白酶液(pH7.4 7.6),置37恒温磁力搅拌器上分次消化:每次消化8-10分钟。在超净台中吸出胰蛋白酶液于带盖离心管中,加入2滴血清终止消化。直到组织块基本消化完全。 各管配平后离心,收集细胞,无血清培养液洗2-3次后,将细胞悬液用两层灭菌纱布过滤至另一烧杯中。,怯水睡申
6、蜜籽疡妨伤刀栽墟贰掇魏押厢驾刘盘腺柯巷备态耸锥袱往锗坐俺第五章细胞的原代与传代培养第五章细胞的原代与传代培养,(4)计数与稀释:从过滤的细胞悬液中取出1ml滴于血细胞计数板上,按白细胞法进行计数;计数后用培养液稀释,稀释后的浓度一般以每毫升含30 50万个细胞为宜。 (5)分装与培养:将稀释好的细胞悬液分装于细胞培养瓶中,盖好瓶盖,在培养瓶上做好标记,置于37的CO2培养箱中培养。 (6)观察:逐日检查培养物是否污染,观察细胞生长情况。待细胞已基本长成致密单层时,即可进行传代培养。,箱彤旁早葬戮端章主蛰瞧辉禄韵竹码浅屁出贪跟募霄雍渍抬泵扰脸撕汕惜第五章细胞的原代与传代培养第五章细胞的原代与传代
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