CD133在子宫内膜癌患者中的表达及患者侵袭转移高危因素研究.doc
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1、CD133在子宫内膜癌患者中的表达及患者侵袭转移高危因素研究为了保证试验的顺利完成,采用的主要仪器和试剂主要由石蜡切片机、扫描电镜、光学显微镜、电热恒温鼓风干燥箱、恒温水浴箱、Trizol试剂等,相关试剂和仪器厂家如下,见表1。 1.3 方法 采用免疫组织化学法测定两组组织CD133表达情况,取制备的乳腺癌组织和癌旁组织,采用10.0%甲醛液固定,石蜡包埋,制备4um厚连续切片。将切片放置在烘烤箱(60)下进行1h烘烤,脱蜡至水,采用PH为7.27.4PBS缓冲液3次清洗,每次3min,采用浓度为3%H2O2溶液放在室温下进行20min孵育,将组织中内源性过氧化物酶消除,采用PBS进行3次冲洗
2、,每次3min,加入1:10普通山羊血清进行15min下孵育,减少非特异性抗原抗体结合。去除组织切片上的血清,滴加一抗(CD133单克隆抗体),4下过夜,室温下放置1h,采用PBS进行3次清洗,每次3min,加入生物素标记的二抗,孵育30min,温度为37。加入辣根过氧化物酶,孵育30min,温度为37,采用PBS进行3次清洗,每次3min,DAB显色,苏木精复染8-10s,中性树胶封片。根据阳性细胞数和染色强度进行半定量测定,在200倍光镜下每张切片随机选择5个视野,每个视野测定3次后取平均值8-9。 1.4 评定方法 随机选择10个视野,在高倍镜下每个视野取100个细胞,阳性细胞数共分为5级。0分:染色细胞占总细胞0.05);子宫内膜癌组织CD133表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期、肿瘤类型存在正相关性(P0.05);子宫内膜癌组织CD133表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期及肿瘤类型关系密切(P
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