东方百合“甜梦”花器官组织培养再生植株研究.doc
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1、东方百合“甜梦”花器官组织培养再生植株研究百合(Lilium spp.)是百合科(Liliaceae)百合属(Lilium)多年生具地下鳞茎的草本植物,具有很高的观赏价值和经济价值。目前鲜花市场上流行的观赏百合有四大品系(铁炮系、亚洲系、东方系、L/A系),东方百合系列种植面积最大。“甜梦”属于东方百合的1个品种,其花色粉红,香气宜人,是近年进口花卉品种之一。百合组织培养中常用的方法是以百合鳞片作为外植体,用0.1%升汞溶液灭菌时间较长,而污染率相对较高。近年来以花器官为外植体进行培养的报道,主要以亚洲百合为主,花器官以花托、子房、花柱的分化率较高,较适宜的培养基是6-BA与NAA的配合使用。
2、其次为东方百合,赵得萍对东方百合Sorbonne花器官进行的培养则花萼、花丝、花瓣均有较高的分化率。刘雅莉以Sorbonne花器官进行培养则直接诱导出不定芽。杨美纯等以“马可波罗”品种花器官为外植体,以花托诱导率为100%最高。王月等采用“梯伯”品种的再生植株嫩叶建立无性体系,张延龙则直接以“西西”品种叶片为外植体诱导愈伤组织,但诱导率不高。试验在前人的研究基础上,以东方百合“甜梦”花器官为外植体,建立其再生植株快速繁育体系,以期为百合的种苗工厂化生产充实理论依据。 1.材料与方法 1.1试验材料 东方百合“甜梦”品种花朵。 1.2试验方法 1.2.1灭菌及初代培养 选取花蕾和半开的花朵作为外
3、植体进行灭菌。在超净工作台上将花蕾用75%酒精擦拭,0.1%HgCl2灭菌5 min;半开的花朵用洗衣粉溶液浸泡5min,自来水冲洗30 min,在超净工作台上用75%酒精灭菌50 s,0.1%HgCl2灭菌5 min,把灭菌过的外植体的花药、花托、柱头、子房等部位切开,分别接种于MS+6.BA 3.0 mg/L的培养基中诱导愈伤组织,6 d后统计污染数和死亡数。 1.2.2愈伤组织分化培养 把花器官各部分培养所获得的愈伤组织切成直径约0.6 cm的小块,接种于MS添加不同浓度6-BA(0-3.0 mg/L)的分化培养基中。30 d后统计分化出的不定芽数。 分化率=分化出不定芽的愈伤组织数/接
4、种愈伤组织总数100。 1.2.3不定芽叶片诱导分化培养 把由愈伤组织产生的不定芽叶片切成1 cm长度的小段,接种于培养基上,30 d后统计诱导率。 1.2.4不定芽结鳞茎及生根培养 选取生长健壮的单株不定芽接种到不同糖浓度的MS培养基中,30 d后统计生根、结鳞茎情况。 1.2.5组培苗移栽 选取具有根及鳞茎(直径1 cm左右)的组培苗移出培养室,在大棚炼苗3 d后,洗净培养基,分别种在大棚内沙床和室外菜地,每个处理种30株,1个月后统计成活数和新长出的根数。 1.3基本培养基及培养条件 基本培养基为MS,pH值5.8-6.0。光照强度2000-3000 Lx,光照时间为12-14 h/d,
5、温度为26-28。 2.结果与分析 2.1花器官的培养 由表1可看出,经过不同方式的灭菌后,总体污染率大部分为0,只有花蕾有少量的污染。存活的花药培养13 d后开始膨大,之后慢慢变绿。花蕾的花托和子房在培养12 d后开始膨大,15 d后花柱也开始膨大,膨大后的子房颜色变绿。半开花朵的花器官培养中,子房比花蕾的子房推迟2 d膨大,有一端可观察到有5-6粒似胚状体小颗粒,柱头也开始膨大。在培养40 d之后,子房、花柱和花药均诱导出愈伤组织。花器官中以子房的诱导率最高,可达83.3%。 2.2 6-BA对愈伤组织分化的影响 由花器官诱导得到的愈伤组织经过多代增殖培养后,得到紧致、表面有绿色颗粒状的愈
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