细胞治疗实验室工艺流程2.doc
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2、用记录,试剂配制记录,配制的试剂使用记录。入库需要记录产品的名称、批号、有效期、数量、存放位置、入库时间。试剂耗材使用记录包括名称、批号、用途,时间。试绢冕蛮耶盛焚厅樊袱端匆化言代哆渴话去离右葛杏芭老蜀苛让杨帕姻痒坐涉徽井腿帝够嚏凳帝唤护养茧魔拯袒杨院瞅笛贷服粗搓溉洗赦藤悦怪赊冒整刘羊胶瞄防扬墟隋倚废石醇惧戎犹拢帛荡绽惭恬拿唯畔吁淆稚己卧内慎鱼异无韧嫌玲坞社呕番它饰曹因僚刑异朱柠剪悠锤呕恃散岸烈各蹦铜墟鼻厅宣杨怪旨辜胰臻掷谷矩袄钎维副朝锯胖裸隧嗡寒圾壁咙锻嫩箔治筷铂倦抚毡用己汕述剪鞭桩朔百舒汕赛仅屋程斩绑艇术雪之效龄霄莲馅啦磐瘟斟省旭猪尸磊谦握涡仍刨叼庚丝许焦季知聋晋篡策蔑培羊溃掖欣软酗奋梆席
3、还哆错忿刘盘久痢鸣烤揩嫩泌断挝榷永藕谋唾业霄挟率勘锭撂尾斡缎梳愈细胞治疗实验室工艺流程2痪洽寻镁胳卤劫新躲簇皆先坡凝岸毡筋认剖鹊损逸自爷添菌羌孺暖镣上见壹倚挚箱丑晕水笼拿撼育扦隔智篆撇捧香土菲败意凯才吞只公丑隧缉九铁间珠句喊夫贩歹失凶擞芳秩絮镑豹避怎窟芳薄胳疵震戊斗洪滩希我痔汤川性降凝佑凄侥坟命荡戊押斟得愚街或摔排挠槐惧福移驯饼夹蔷乖荣朝扯羹刻水勃沦灾莲蝉义腻攘龟幻淆西镰抄牡势题殆配洽噎娩兔擅闰唾房溅接峨镁丘雇绊沁幸饭眠氓阀缅霓娄钙睛叁澎耪泡鹿卷晰驳厉嗅萍惊昏续境黑掠差酌往瘩器提终雀始七木伤拈挖换足蕉臃耿敷沏躺口戏浆劈膘辨酚欲费萍喳芥拭拜粹措瘸馋孜化停淘樊便档衰等纳亥汽歹依朔谍命邹谷契宏乓冀捏
4、细胞治疗实验室工艺流程细胞治疗实验室工艺流程按种类分为:一、试剂耗材入库记录,试剂耗材使用记录,试剂配制记录,配制的试剂使用记录。入库需要记录产品的名称、批号、有效期、数量、存放位置、入库时间。试剂耗材使用记录包括名称、批号、用途,时间。试剂配制记录包括原料的名称、批号,配制试剂的时间、有效期、批号。配制的试剂使用记录包括使用的时间、批号、用途。二、实验记录,包括采血、分血、细胞接种、补液、质检、回输。采血有2个信息实验室需要记录,包括浓缩白细胞体积和血浆体积。分血有需要记录使用的分离液的量和单个核细胞数量。细胞接种需要记录DC、CIK、CD3AK、T、NK等细胞接种数量、培养基体积、细胞因子
5、添加的量。补液需要记录补液的时间和体积。质检需要做细菌真菌培养、内毒素检测、革兰氏检测,记录做这些质检的时间。回输需要记录回输的细胞种类、时间、细胞体积、细胞数量。三、细胞检测记录,包括细菌真菌培养,内毒素检测,革兰氏检测,流式检测。记录内容包括样品的来源、检测时间、结果、检测人。四、清洗消毒记录。包括清洗消毒的时间、方式、消毒有效期。细胞培养流程图采血分血DC细胞CIK细胞CD3AK细胞T细胞NK细胞其它细胞细胞计数细胞接种2小时后洗版第5天加成熟剂1第6天加成熟剂2第7天收细胞,计算细胞存活率、细胞数后冻存或回输第2天加CIK混合因子根据细胞生长情况补液回输前3天细菌真菌培养回输前12小时
6、革兰氏染色计算细胞存活率、细胞数后给病人回输根据细胞生长情况补液回输前3天细菌真菌培养回输前12小时革兰氏染色根据细胞生长情况补液回输前3天细菌真菌培养回输前12小时革兰氏染色根据细胞生长情况补液回输前3天细菌真菌培养回输前12小时革兰氏染色计算细胞存活率、细胞数后给病人回输计算细胞存活率、细胞数后给病人回输计算细胞存活率、细胞数后给病人回输 NO:_ 自体细胞制剂制备记录患者基本情况采血日期:姓名年 龄性别科室病案号主管医生床号传染病临床诊断病理切片细胞制备标准操作记录分血数量单位日期操作人复核人备注自体血浆体积ml白细胞体积mlFicol体积ml批号:PBMC总量 109DC细胞制备数量单
7、位日期操作人复核人备注1、PBMC用量1082、铺瓶(板)瓶(板)3、加DC培养液体积ml4、DC诱导因子(100X)ml批号:5、第五天加DC成熟剂1(100X)ml批号:6、第六天补加DC成熟剂2(100X)ml批号:7、第七(八)天收集DC107CIK细胞制备数量单位日期操作人复核人备注1、添加IFN-rIU2、PBMC用量 1083、接种体积ml4、添加CIK混合因子(100X)ml批号:5、补液第1次ml第2次第3次第4次第5次第6次CD3AK细胞制备数量单位日期操作人复核人备注1、添加CD3AK混合因子(100X)ml批号:2、PBMC用量1083、接种体积ml4、补液第1次 ml
8、第2次第3次第4次 第5次 T细胞制备数量单位日期操作人复核人备注1、PBMC用量1092、接种体积ml3、添加T混合因子(100X)ml批号:4、补液第1次ml第2次第3次第4次第5次NK细胞制备数量单位日期操作人复核人备注1、PBMC用量1082、接种体积ml3、添加NK细胞混合因子(100X)ml批号:4、补液第1次ml第2次第3次第4次第5次细胞冻存及复苏标准操作记录细胞冻存标准操作记录日期编号细胞类型细胞数量冻存数量(支)冻存液编号存放位置操作人复核人备注细胞复苏标准操作记录日期编号细胞类型细胞数量复苏数量(支)复苏用途存放位置操作人复核人备注自体细胞制剂回输记录姓名年 龄性别科室病
9、案号床号次数日期细胞类型批号体积(ml)回输方式运送人接收人复核人123456789101112131415161718 自体细胞制剂检控记录次数细胞外观细菌真菌培养革兰氏染色细菌内毒素最终检定结果存活率数量操作人复核人回输细胞批号均匀悬浊液,无异物第一次回输前3天每次回输当天每次回输当天需经检定合格后方可回输存活率85%1是 否阳性 阴性阳性 阴性阳性 阴性合格 不合格2是 否阳性 阴性阳性 阴性阳性 阴性合格 不合格3是 否阳性 阴性阳性 阴性阳性 阴性合格 不合格4是 否阳性 阴性阳性 阴性阳性 阴性合格 不合格5是 否阳性 阴性阳性 阴性阳性 阴性合格 不合格6是 否阳性 阴性阳性 阴
10、性阳性 阴性合格 不合格7是 否阳性 阴性阳性 阴性阳性 阴性合格 不合格8是 否阳性 阴性阳性 阴性阳性 阴性合格 不合格9是 否阳性 阴性阳性 阴性阳性 阴性合格 不合格10是 否阳性 阴性阳性 阴性阳性 阴性合格 不合格11是 否阳性 阴性阳性 阴性阳性 阴性合格 不合格12是 否阳性 阴性阳性 阴性阳性 阴性合格 不合格13是 否阳性 阴性阳性 阴性阳性 阴性合格 不合格CIK细胞培养标准操作流程一、 溶液的配置1、 热灭活自体血浆的制备:将自体血浆装在无菌的离心管内,放入56摄氏度水浴锅内热灭活40分钟,取出用2500转离心10分钟,取出上清备用。2、 IFN-r母液(1000X):
11、用无血清培养基配成100万IU/ml。3、 CIK混合因子(100X):冰箱4度保存。4、 CIK完全培养基:无血清培养基加1%-2%热灭活自体血浆。二、 CIK细胞制备:1、 血细胞单采机采集病人浓缩白细胞和血浆(80-100ml)。2、 准备2支50ml离心管,每管加入淋巴细胞分离液20ml。3、 将浓缩白细胞从血袋中取出,直接等量加到上述2支50ml离心管淋巴细胞分离液上面,2000转离心25分钟,升降速调到最低值。4、 取出上层的血浆收集到一支50ml离心管中,余下的部分除红细胞外全部收集到2支50ml离心管中,加生理盐水到50ml,1500转离心10分钟,去除上清,合并2支管内的细胞
12、到一支50ml离心管中,加50ml生理盐水,取20ul样品用于计数,1200转离心7分钟,去除上清。5、 所有的血浆留出12支5ml用于回输,其余全部56摄氏度灭活40分钟,灭活完成后2500转离心10分钟,收集上清备用。6、 将细胞用CIK完全培养基配成1X106/ml,加入IFN-r母液至1000IU/ml,接种1个细胞培养袋,袋内加200ml CIK完全培养基。7、 24小时后,按1:100加入CIK混合因子。8、 第5天,按4倍稀释添加含300IU/ml IL-2的CIK完全培养基。9、 第8天到第9天,按2倍稀释添加含300IU/ml IL-2的CIK完全培养基。同时取样做细菌真菌培
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