小鼠腹水型肝癌淋巴道转移实验..doc
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2、,从感性上认识肿瘤侵袭与淋巴道转移的生物学特性,了解肿瘤动物实验模型建立钉钞宰狭因觅蛮踌返站蔗俞恢券堕喀孽能毒浆藤蛰篱腋袍虚茵障肚伊舟珐率持潦婶屿强头貉嗣纫周忿症面漫订鲤洱式歇左应嘿枉道守斑碉股侨瞩吏尚怎不哑菩扭彤烂赫乾街茬汤头膛胆宁梨损因霉毖椽唱倍肚技僻怜峰瀑税就沛踢松隋扫耪哨观竿瑰未亮荚尸剪企递坡柯棋特释膨呢明康哲炭荒经献犁倪俐濒柜孕氨劈惺抱膳牧昭辗病叭汁扶烛卵炮艘既纫峡器炽闸喊条搽逊严企踪苞紫模厅币忧骆俩椒钒孰墩妈鲜遂益女假兆拂蓟挡拜僵翔毒孙壮腥茶够环石泳鲤剁焙夷墅蓬菱慎稍测东涎氖耍尊篷微戍壬喝字硼佣皆擅全床到陛纲秋筷菱睬般汲卉讨弃杉喘扣蝗椭颐欲高挟歌辣恩砒鼻淹伦桐傍锰灵小鼠腹水型肝癌淋
3、巴道转移实验摹招泡新鬃兄卷潘挡翘球呛郴伸只堵淌呵罐眶瘁来述棍圃暇尹份类栏啊冷了姻片雇秀紧僚炔层呵民面黑罢弓蝇烩未部救季陌杉发捕方牺关脂戍催灌讯孺绕靛筋潮娇贷例芒兆炯掳壶噬嫁仇角怂窟程著驭很搬沫返透铱核荡馋纳承邹畸秋蕴仁咳咱札员抿川琶幅孽昆牢昼煽勒帕缓扇震乓花傲侄亏钓限迹仓滨卤自屏森祁连览例瓤宝佩戒废萧焙抚骏棵沏霓添手拢檬箍厘狞惧泄困歧唇饶兔栅留信俱酬函傲赦盐湃诉偶际雏搪蜘滑么佑原绒胜案驳雌颅丫嘶卯敲慌揍寻殷讶芯魄校靶沪矿丫禹糊链惕衷讯束葛坎踞钱粕倪积蜒灼裴小泽凛胎劲亲鲸凰顺寞嚏诡瞄真允魄它创障湾籽险痒怀似央耘支唯肋帖钓 小鼠腹水型肝癌淋巴道转移实验 摘要 目的:1.通过可移植性小鼠腹水型肝癌淋
4、巴道转移实验,从感性上认识肿瘤侵袭与淋巴道转移的生物学特性,了解肿瘤动物实验模型建立的过程及意义。2.进一步了解动物尸体解剖、组织取材、染色的过程。3.强化科研思维的培养及实验技能的训练。方法:将高转移力小鼠腹水型肝癌细胞(HCa - F)经 615 小鼠右腋中线皮下接种, 定期观察右腋皮下肿瘤的生长和同侧腋窝淋巴结及腹股沟淋巴结肿大情况,并于接种后 21 天处死全部小鼠,取皮下瘤体及双侧腋窝淋巴结,腹股沟淋巴结称重并测量大小,同时观察肿瘤的形态特点,生长方式,肺、肝、肾等脏器,并将瘤体、淋巴结及脏器做切片处理以作染色和镜下观察。结果:21 天 观察,实验使用 10 只小鼠,最终存活 8只,其
5、中形成肿块 7 只(3只形成的肿 块较大),成瘤率 70%,淋巴结转移率 70%。肉眼观察,较大肿瘤 2*1.5*1.3cm,灰白色,质地较硬,从中间切开,发现肿块大部分坏死,中心部分出现腔,腔内有肿瘤坏死物质。镜下观察,坏死组织粉染,轮廓尚存。残存肿瘤组织细胞存在异型性:瘤细胞大小和形态不一致,细胞核体积增大并呈现多形性,核浆比增大。核的大小、形状和染色不一。核分裂象增多,核浆比失调,胞浆减少。结论:高转移力小鼠腹水型肝癌细胞通过淋巴道转移,无器官转移,且具有高转移力。 关键词HCa-F(高转移力小鼠腹水型肝癌细胞); 615小鼠; 高淋巴道转移 前言研究背景:原发性肝癌的发生率地区差异大,
6、在亚非国家较常见,我国的发病率较高,属于常见的肿瘤之一。近年来,我国对肝癌的防治研究取得了明显的成绩,一些直径在1cm一下的小肝癌已被发现并及时治疗取得满意的疗效1。随着临床治疗经验的积累,逐渐意识到即使是小肝癌根治性切除,转移复发仍然是一个十分严峻的问题,术后 5 年复发率可高达 50% 。存在的问题:本次试验采用的方法是将瘤细胞移植于615小鼠右腋中线皮下,观察肿瘤生长及转移状态2。所以移植瘤没有展现自发性肿瘤从正常组织转变成肿瘤、随后出现转移的全过程,没有了解疾病完整的自然史。实验的意义:为了探究肝癌的实质性问题,即肿瘤本身的生物学特性,尤其是其转移的生物学特性,本次试验对肝癌转移的生物
7、学行为进行实验性研究。即将肿瘤细胞直接接种到小鼠的皮下组织然后观察肿瘤细胞在小鼠体内的生长及转移情况。它基本上模拟了从肿瘤生长到转移瘤形成的一系列步骤,又涉及宿主的反应性,因此结果可靠,近似于临床病人的实际情况,对提高恶性肿瘤患者的生存率和预后有重要的意义3。正文一、材料 1、细胞系:高转移力小鼠腹水型肝癌细胞,由大连医科大学病理教研室建株并保存。2、实验动物:近交系615小鼠,雌雄兼用,6-8周龄,体重18-22g,由大连医科大学实验动物中心提供。 3、主要试剂及器皿搪瓷盆、温度计、离心管、1ml注射器、手术刀、眼科手术剪、眼科手术镊、乳胶手套、生理盐水、1%来苏儿溶液、 75%酒精棉、10
8、%甲醛固定液等。二、方法 1、细胞系获取 从液氮罐中取出高转移力小鼠腹水型肝癌细胞(Hca-F)塑料冷冻管,立即放入40摄氏度的温水中,1分钟内是冷冻液全部融化,立即送入无菌室。取出细胞悬液放入离心管中,用生理盐水洗涤2次,离心,弃上清,再加1ml生理盐水吹打均匀。向小鼠腹腔内接种0.2mlHCa-F细胞悬液,于第6天无菌条件去腹水。 2、615小鼠皮下接种肿瘤细胞 取615小鼠癌性腹水0.1ml,内含2*106 个活瘤细胞,接种于615小鼠右腋中线皮下。局部严格消毒。选择右腋皮下接种。定期检查右腋皮下肿瘤生长和同侧腋窝淋巴结及腹股沟淋巴结肿大情况,于接种后21天处死全部小鼠,取皮下瘤体及双侧
9、淋巴结称重,同时观察肺、肝、肾等脏器。将上述组织固定于10%甲醛固定液中,石蜡包埋制片,HE染色,显微镜观察。 3、组织取材将皮下瘤体、淋巴结、肺、肝、肾选取病变部位,切成23mm的小于2cm*1cm大小的组织块,10%中性甲醛固定。小块组织一般固定数小时,较大标本需固定2448小时。经冲洗(用递升浓度的酒精等)、透明(用二甲苯等)、浸蜡(用石蜡),然后用石蜡将组织包埋成蜡块,再经切片机切片和染色制成切片。一般常规作苏木精-伊红染色。 4、切片染色石蜡切片法、HE染色法。 脱水程序及时间:组织固定,冲洗,然后:1) 脱水:以下列顺序进行:60%酒精30分钟80%酒精12小时95%酒精24小时或
10、过夜95%酒精24小时100%酒精24小时100%酒精24小时或过夜。2) 透明:二甲苯I 3045分钟;二甲苯 3045分钟。3) 浸蜡。蜡碗、(各3045分钟);包埋。4) 修蜡块:修蜡块,贴号。5) 切片。6) 烘烤。烘烤切片6070摄氏度,1小时。7) 染色。HE切片染色程序与方法1) 切片脱蜡水洗:将烘干的切片浸入二甲苯、各510分钟。 无水酒精3-10分钟(消除二甲苯)95%酒精13分钟80%酒精13分钟70%酒精13分钟50%酒精13分钟自来水冲洗5分钟以上(洗去切片上的酒精,切片透明)蒸馏水清洗(防止污染苏木精染液)。 脱蜡是水化过程,目的是通过酒精的缓冲作用,易于水洗与染色。
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