2018年C-反应蛋白及临床应用-文档资料.ppt
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1、Protein Structure CRP结构 C反应蛋白的生理和生化 在细胞因子IL-6家族诱导下,CRP在肝中合 成迅速。 正常合成率为 l10 mgd,急性炎症时每 天合成超过 lg/d。 在急性相反应高峰时肝大量合成蛋白,其中 20是合成CRP。 当IL-6刺激物缺乏时,在 24 h内合成率降 至正常。 循环中CRP半衰期约19h,但一旦它与配体结 合,可快速的被清除。 肝外合成对血清水平影响作用很小。 CRP的生物学功能 CRP的生物学功能-机理 结合坏死的内源性物质 在钙离子存在的情况下,CRP能结合坏死 的内源性物质和效应细胞, 当正常的脂质双 层结构被破坏致使内部磷脂暴露时,C
2、RP可 发生与宿主细胞的结合。 在系统性红斑狼疮的鼠模型中,注射CRP可 改善SLE的状况。 人CRP基因的多态性导致的低基础水平表达增加 了发生系统性狼疮的风险。 CRP量的减少可能与SLE发病机理有关。 CRP量的减少使结合的细胞碎片减少。 CRP的生物学功能-机理 结合外源性物质 细菌、真菌、寄生虫中的细胞壁磷酸胆碱。 CRP具有保护机体抗细菌感染的能力。 CRP 保护机体抵抗致命性的细菌脂多糖和各 种炎症介子的能力。 CRP的生物学功能-机理 结合配体的CRP激活下列生物系统,导致 配体的消除: CRP对补体系统的激活. CRP结合IgGFcR,增强自然杀伤细胞的活性 。 CRP的调理
3、性质,调理即刺激细胞吞噬作用 。 CRP和血小板激活因子(PAF)结合 抑制PAF 刺激的血小板聚集。 CRP的生物学功能-机理 CRP具有多效性的作用。 当抑制干扰素的合成时 ,CRP可诱导IL-1受 体拮抗剂而增加抗炎细胞因子IL-10的释放 . CRP也可诱导炎症反应。 CRP向上-调节内 皮细胞粘附分子的表达,刺激许多细胞释放IL -8, 增加血浆纤维蛋白酶原催化剂抑制剂-1 的表达和活性、增加IL-1, IL-6, IL-18, 和 肿瘤坏死因子的释放. CRP诱导或抑制炎症反应依赖于环境。 CRP功能 识别和启动靶效应细胞及其产 物并将其从组织中清除。 吞噬溶解入侵微生物。 急性相
4、蛋白CRP合成的生物调控 CRP基因位于1号染色体短臂,只有一个内含子 ,其分离编码信号肽的区域。 肝脏CRP合成的调节主要发生在转录阶段。由IL -6诱导,IL-1可增加此作用。 CRP启动子最近区为STAT3 和 Rel 蛋白的结合 部位。 这些因子的相互作用增加DNA 结合C/EBP家属成 员的稳定性,从而有效地诱导了CRP基因的表达。 神经元细胞、动脉硬化斑块、单核细胞和淋巴 细胞也可以合成CRP。在这些部位的调节机制还不 清楚。 修饰的CRP(m-CRP) -“Modified“ CRP 目前认为m-CRP是原CRP的单体。 与天然CRP不同,表现在分子大小,溶 解度,抗原性,带电荷
5、数等方面的差别. m-CRP具抗菌作用。 m-CRP具有强大地诱发炎症的作用。 方 法 灵敏度 参考献 试管内沉淀试验 - JExpMed1930;52561 毛细管内沉淀试验 1020mg/L AmJMed1950;8445 改良平板双扩散法 1020mg/L IntArchAllergy1962 改良琼脂柱扩散法 3.0mg/L ProcSocExpBiol1955 改良单扩散法 1.0mg/L ActaPatholMicrobiolScand 琼脂糖凝胶电泳法 1.0mg/L ClinChimActa1969 放射电免疫扩散法 10g/L JClinLabInvest1973 补体结合试
6、验 0.6mg/L ProcSocExpBiol1954 胶乳凝集试验 1.0mg/L Nature(London)1961 高敏乳胶增强浊度 0.35mg/ml Dade Germany2000 荧光抗体法 Nature(London)1961 放射免疫测定法 3g/L JLabClinMed1976 检测方法 CRP检测方法 - 免疫沉淀试验 检测CRP原始方法. 将兔抗CRP血清吸入毛细管内。 把它浸入被测血浆或血清内,因毛细管虹吸作 用被吸入,与抗CRP血清形成接触界面。 这种方法较粗糙,取得结果时间较长,也不太正 确可靠. CRP检测方法 - 免疫浊度法 可溶性CRP-Ag与可溶性抗
7、CRP-Ab反应,形成可见的网 络状沉淀性IC复合物点. IC复合物对光具有散射作用,使溶液具有肉眼尚不可见 的浊度。 在被测样品中加抗血清后一定时间,测定反应系统散射 光强度或浊度变化,可对被检物及其浊度加以检测。 根据仪器的光学系统,浊度法分为散射浊度法和透射浊 度法两类。 许多自动化生化分析仪和自动化免疫测定仪都可CRP测 定项目。 CRP检测方法 - 胶乳凝集试验(LAT) 将强化的兔抗CRP抗体固定于胶乳微粒上。 加入被测样品后与CRP在3分钟内形成肉眼可见 的凝集物。 胶乳强化浊度法的灵敏度优于传统浊度法,试 剂稳定性佳。 检测方法 - 标记免疫测定 ELISA和免疫发光法和化学发
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