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1、遗传育种学 Genetic thremmatology 遗传育种学 Genetic thremmatology PEG法对海藻种间原生质体的融合也有效。近 几年,PEG法已使三组种间海藻原生质体融合成 功,它们是:双星藻和纤细水绵、长石莼和囊礁 膜、条斑紫菜和肠浒苔。 张大力用PEG诱导长石莼和囊礁膜原生质体的 融合研究中观察到,原生质体的质且好坏直接 影响融合率的高低,甚至决定融合的成败,只有 用幼嫩新鲜的藻体制备的原生质体进行融合才能 成功。 遗传育种学 Genetic thremmatology,遗传育种学 Genetic thremmatology 遗传育种学 Genetic thre
2、mmatology 聚乙二醇化学融合法特点 聚乙二醇具有广泛的适应性、简便、快速、高效的优点。 缺点: PEG诱导细胞融合的有效浓度范围很窄,最适浓度为50- 55%,此时对细胞毒性很大 PEG诱导悬浮细胞的融合率远远低于诱导同样细胞单层培 养时的融合率。 PEG诱导产生的杂交细胞频率仍在10-5较这一很低水平。 容易形成多细胞融合体,不容易在显微镜下观察细胞融 合的过程。 遗传育种学 Genetic thremmatology,1.3 物理融合 优点:,1.3.1 电融合法 自从Zimmermann(1978)等和Senda (1979)等报道应用脉冲电流诱导植物原生质体 融合取得成功以来,
3、为电融合技术发展奠定了基 础。,诱导率较高:是PEG的100倍 操作简单、快速,不存在细胞毒性问题 可以显微镜观察融合过程 缺点:采用高压电脉冲,使细胞内部某些低电 离电位分子可能发生离解而造成“电损伤”,影 响融合细胞的存活,2,遗传育种学 Genetic thremmatology 电融合实例 刘沛霖以大鳞副泥鳅的囊胚细胞为材料,在 915室温下,电场液用0.02mol/L甘露醇加 1mmol/L氯化钙配成,细胞密度为(2.5 3)X 104,细胞膜紧密接触2 5min,脉冲处理13 次,时间常数10 50us,融合率为46.72%,细胞 存活率达88.6% 遗传育种学 Genetic t
4、hremmatology,遗传育种学 Genetic thremmatology 电融合装置电路方框原理图 遗传育种学 Genetic thremmatology,1.3.2 激光融合 优点:无毒,融合体成活率高,能保证只 有所选择的细胞或原生质体得到融合。 缺点:每次只能产生一个融合体,激光微 束系统的设备昂贵。,遗传育种学 Genetic thremmatology 三、细胞融合过程 1. 点接触:2个细胞表面结合在一起的凝集状态。 2. 面接触:加入PEG等融合物质,则进入面融,遗传育种学 Genetic thremmatology 异核体 同核体,合状态,细胞呈斜球形。 3. 融合:双
5、方的细胞质和细胞膜完全合并,结 果形成一个圆球形或卵圆形融合细胞,即异 核体。 3,遗传育种学 Genetic thremmatology,遗传育种学 Genetic thremmatology,四、体细胞杂交应用 4.2、植物育种,4.1 微生物育种 我国的邢孔昭等(1988)将巴龙霉素产 生菌与新霉家产生菌的高产变异株进行了 种间原生质体融合,获得了比区龙霉素产 生菌原始菌株单依产量(300ugmL)高5-6 倍的重组体菌株。 遗传育种学 Genetic thremmatology 4.3 水产生物方面的应用 张大力等将长石莼与囊礁膜原生质体融 合,并将其融合体培养了20天,形成自养细 胞团。 Fujita将淡红紫色的野生型条斑紫菜与绿 色突变型的条斑紫菜的原生质体融合,培育 出长达60cm左右的嵌合叶状体。,马铃薯与番茄、拟南芥菜与本油菜 等是些属间有性不亲和的组合,经细胞 融合技术和组织培养技术,已培养出前 所未有的再生植株 遗传育种学 Genetic thremmatology 在鱼类,易泳兰等把大鳞副泥瞅鳗尾泥 鳅杂交囊胚细胞与大鳞副泥鳅卵融合,培育 了15.7(6尾)的融合鱼。 将鲤鱼囊胚细胞与红鲫鱼卵融合,培育了 3.5%融合鱼苗,工作还表明,鱼类囊胚细胞 与末受精卵的电融合可以简化细胞核移植操 作过程,一次可以处理卵数相当于一次核移 植卵数的2-3倍。,4,
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