2018年第25章病毒感染的检查方法与防治原则-文档资料.ppt
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1、第一节 病毒感染的检查 病毒感染的检查 检测内容 查病毒 查特异性抗体 病毒颗粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶类:如逆转录酶 电镜直接观察 光镜检查包含体 分离培养 一、标本的采集与送检 原则基本与细菌相似,但应注意: 1.标本用“双抗”或两性霉素B处理 2.低温保存,尽快送检 3.血清学诊断采双份血清 二、病毒的分离与鉴定 (一)病毒的分离培养(一)病毒的分离培养 细胞培养细胞培养(cellcell cultureculture) 鸡胚接种鸡胚接种(egg inoculationegg inoculation) 动物接种动物接种(animal inoculationanimal inocula
2、tion) 二、病毒的分离与鉴定 一般程序:一般程序: 标本标本 无菌处理无菌处理 动物接种动物接种 鸡胚培养鸡胚培养 细胞培养细胞培养 指标指标阳性阳性 指标指标阴性阴性 病毒鉴定病毒鉴定 盲传盲传2 23 3代代 指标阴性指标阴性 病毒阴性病毒阴性 (一)病毒的分离培养(一)病毒的分离培养 1.细胞培养 单层细胞培养单层细胞培养(monolayer cell culturemonolayer cell culture) 分类分类 悬浮细胞培养悬浮细胞培养(suspended cell culturesuspended cell culture) 原代细胞原代细胞(primary cellp
3、rimary cell) 细胞种类细胞种类 二倍体细胞(二倍体细胞(diploid celldiploid cell) 传代细胞系传代细胞系(continuous cell linecontinuous cell line) 病毒的细胞培养病毒的细胞培养 细胞培养瓶细胞培养瓶单层细胞单层细胞 1.1.细胞培养细胞培养 (1)(1)原代和次代细胞培养原代和次代细胞培养 组织 组织块 分散的单个细胞 单层细胞 剪碎 培养基 ( (原代细胞原代细胞) ) 单层细胞单层细胞 ( (次代细胞次代细胞) ) 传代培养传代培养 蛋白酶 特点特点:对多种病毒敏感对多种病毒敏感 生长能力有限生长能力有限, ,
4、获取成本高获取成本高 可携带潜伏病毒可携带潜伏病毒 1.1.细胞培养细胞培养 (1)(1)原代和次代细胞培养原代和次代细胞培养 (2)二倍体细胞培养 体外分裂体外分裂5050100100代仍保持二倍体染色体代仍保持二倍体染色体 数目数目,可用于病毒分离和疫苗生产可用于病毒分离和疫苗生产。 特点:对多种病毒敏感 不带异种蛋白(人源性) 不带病毒,无致瘤潜能 可传50代左右 1.1.细胞培养细胞培养 (3) 传代细胞培养 特点特点:对多种病毒敏感性高对多种病毒敏感性高 繁殖能力高繁殖能力高,传代时间长传代时间长 有致癌危险,不能用于疫苗生产有致癌危险,不能用于疫苗生产 1.1.细胞培养细胞培养 2
5、.2.鸡胚培养鸡胚培养 采用孵化采用孵化9 91414天的鸡胚天的鸡胚 绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜(allantocherionallantocherion) 痘苗病毒、人类疱疹病毒痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔尿囊腔(allantoic cavityallantoic cavity) 接种部位接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔羊膜腔(amniotic cavityamniotic cavity) 流感病毒的初次分离流感病毒的初次分离 卵黄囊卵黄囊(yolk sacyolk sac) 嗜神经病毒嗜神经病毒 2 2、鸡胚培养、鸡胚培养 优点:优点:易管理易管理,不带微生物不带微
6、生物,成本较低成本较低 缺点:缺点:操作程序复杂操作程序复杂 3.动物接种 应用:应用:尚无敏感细胞的病毒培养尚无敏感细胞的病毒培养 动物:动物:兔、鼠、黑猩猩、猴等兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点:优点:结果易观察,可建立动物模型结果易观察,可建立动物模型 缺点:缺点:有饲养条件要求,费用高有饲养条件要求,费用高,动物动物 体内常带有潜伏病毒体内常带有潜伏病毒 1 1病毒增殖鉴定病毒增殖鉴定 (1)(1)细胞病变效应细胞病变效应(cytopathcytopathicic effect,effect, CPE CPE ) 细胞变圆、聚集、坏死、溶解细胞变圆、聚集、坏死、溶解 或脱落等(多数病毒)或脱
7、落等(多数病毒); 形成多核巨细胞或称融合细胞形成多核巨细胞或称融合细胞 (麻疹病毒麻疹病毒、巨细胞病毒巨细胞病毒、呼吸道合呼吸道合 胞病毒胞病毒等)等); 在培养细胞中形成包涵体在培养细胞中形成包涵体(狂狂 犬病病毒、麻疹病毒等犬病病毒、麻疹病毒等)。)。 (二)病毒的鉴定(二)病毒的鉴定 细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落 ( (1 1) )细胞病变效应细胞病变效应( (cytopathic effect, cytopathic effect, CPECPE) ) 麻疹病毒麻疹病毒 感染细胞感染细胞 呼吸道合胞病呼吸道合胞病 毒感染细胞毒感染细胞 形成多核巨细
8、胞或称融合细胞形成多核巨细胞或称融合细胞 ( (1 1) )细胞病变效应细胞病变效应( (cytopathic effect, cytopathic effect, CPECPE) ) 形成包涵体形成包涵体( (inclusion bodyinclusion body) ) ( (1 1) )细胞病变效应细胞病变效应( (cytopathic effect, cytopathic effect, CPECPE) ) 腮腺炎病毒感染细胞腮腺炎病毒感染细胞 ( (2 2) )红细胞吸附红细胞吸附(hemadsorptionhemadsorption ) 病毒病毒囊囊膜表面血凝素膜表面血凝素( (H
9、AHA) ) 红细胞红细胞表面表面HAHA受体受体 ( (3 3) )干扰现象干扰现象(interferenceinterference ) 风疹病毒风疹病毒人胚肾细胞人胚肾细胞 病毒增殖,病毒增殖,CPECPE( () ) 埃可病毒埃可病毒人胚肾细胞人胚肾细胞 病毒增殖,病毒增殖,CPECPE( () ) 人胚肾细胞人胚肾细胞 风疹病毒风疹病毒? 埃可病毒埃可病毒 CPE(-)CPE(-)风疹病毒风疹病毒( (+)+) 埃可病毒埃可病毒(-)(-) CPE(+)CPE(+)风疹病毒风疹病毒(-)(-) 埃可病毒埃可病毒(+)(+) ( (4 4) )细胞代谢改变细胞代谢改变 细胞代谢变慢细胞
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