2018年实验三细胞化学成分显示-文档资料.ppt
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1、掌握血涂片及骨髓涂片制作方法。 掌握碱性蛋白、过氧化物酶及核酸显示的原理。 熟悉上述化学成分在细胞中的分布。 了解上述化学成分显示的方法。,一、目的要求,二、实验内容和实验方法,细胞内碱性蛋白的显示 DNA和RNA的显示 过氧化氢酶的显示,细胞内碱性蛋白的显示,实验原理 标本经三氯醋酸处理抽提掉核酸后,用不同pH值的快绿染液分别染色,使细胞内的酸性蛋白和碱性蛋白质显示出来。,实验方法 1. 临时装片的制备。 2. 固定:70%乙醇,10min。 3. 7090 ,5%三氯醋酸,15分。 4. 清水冲洗。 5. 染色:碱性固绿染色5min。 6. 清水冲洗。 7. 晾干,镜检。,DNA和RNA的
2、显示,实验原理 利用碱性染料甲基绿和派洛宁处理细胞,可使其中的DNA和RNA呈现出不同的颜色,这种颜色上的差异是由DNA和RNA聚合程度的不同所引起。, 实验方法蟾蜍血涂片DNA和RNA的显示 1. 制备蟾蜍血涂片:同上。 2. 固定:70%乙醇,5min,晾干。 3. 染色:甲基绿派洛宁,10min。 4. 清水冲洗。 5. 分化:纯丙酮。 6. 镜检。,1. 临时装片的制备。 2.固定:70%乙醇,10min。 3. 7090 ,5%三氯醋酸,15分。 4. 清水冲洗。 5. 染色:碱性固绿染色5min。 6. 清水冲洗。 7. 风干,镜检。,1. 制备蟾蜍血涂片:同上。 2. 固定:70%乙醇,5min,晾干。 3. 染色:甲基绿派洛宁,10min。 4. 清水冲洗。 5. 分化:纯丙酮。 6. 镜检。,碱性蛋白 DNA和RNA,过氧化氢酶的显示,实验原理 过氧化氢酶系能把许多胺类物质氧化为有色化合物,若用联苯胺混合液处理标本,细胞内的过氧化氢酶能把联苯胺氧化为蓝色的联苯胺蓝,进而变为棕色的联苯胺腙。,实验方法家兔骨髓细胞中 过氧化氢酶的显示 取材。 2. 固定:0.5%硫酸铜,30s1分钟。 3. 氧化: 联苯胺,36分钟。 4. 清水冲洗。 5. 染色: 1%番红,12min。 6. 清水冲洗。 7. 晾干镜检。,
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