2018年实验九动物细胞培养-文档资料.ppt
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1、一、实验目的,掌握无菌操作; 掌握原代和传代细胞培养; 了解培养成纤维细胞的形态。,原代培养 :培养直接来自动物机体的细胞群,将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶称为传代或传代培养。 细胞株:从原代培养细胞群中筛选出的具有特定性质或标志的细胞群。 细胞系:从肿瘤组织培养建立的细胞群或培养过程中发生突变或转化的细胞,可无限繁殖。,二、实验原理,三、实验器材与试剂,1. 器具 显微镜、电热恒温水浴锅、天平、CO2培养箱、蒸汽灭菌器、超净工作台、解剖刀、 眼科剪、眼科镊、培养皿 、锥形瓶、容量瓶、纱布、培养瓶、移液枪。 2. 材料 9 - 12 日龄发育良好的鸭胚。,3. 主要试剂 双蒸水、Han
2、ks液、0.25%胰蛋白酶、EDTA、NaHCO3 、台盼蓝、洋红。 营养液:DMEM培养基(含8%小牛血清、1万单位/ml青、链霉素)。 维持液: DMEM培养基(含5%小牛血清、1万单位/ml青、链霉素)。,四、原代培养,1.酒精棉球消毒鸭蛋,剥出鸭胚,去头、翅、爪和内脏, 加Hanks 液,剪碎为0. 5 -1mm3 的小块, Hanks 液洗涤2 - 3 次。 2. 组织块移入培养瓶,间距0.5cm摆放后倒置培养瓶,加少量营养液,保持湿润,37 培养,2hr后翻转培养瓶,添营养液继续培养。 3. 定期观察细胞贴壁生长状况,如颜色变黄,说明细胞生长,3-5天后更换培养液。 4 .倒置显微
3、镜下观察拍照。 5.单层细胞用Hanks 液洗涤后,加入维持液,用于原代细胞维持。,五、传代培养,当培养细胞接近汇合成片时,倾去培养液。 加入0. 25 %(含0. 02 %EDTA )消化2-3分钟,倾去大部分消化液,留少量消化液浸润细胞。发现细胞层出现裂痕或空洞后,加入Hanks 液洗去残留消化液,终止消化。 加适量营养液吹打分散,补加营养液后,1:2分装培养。 汇合后挑取少许细胞,染色,观察拍照。,原代培养的绍鸭成纤维细胞,相差显微镜照片,正常细胞,凋亡细胞,分裂中期细胞,传代培养的绍鸭成纤维细胞形态(DAPI染色),六、作业,1. 细胞培养过程中应该注意哪些事项? 2. 描绘培养成纤维细胞的形态(或提供照片)。,
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