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1、,教材:医学生物实验学(自编) 参考书: 医学生物学,杨抚华,四川科学技术出版社,第五版 医学生物学,傅松滨,人民卫生出版社,第六版,教材内容 学习方法 1.预习-听课-复习 2.归纳总结,记笔记,理解性记忆,第一章 细胞生物学实验技术,一、显微镜技术,显微镜与分辨率,分辨率,即极限分辨率,也即两点间的最小距离 R人眼=0.07mm R光镜=0.2um R电镜=0.2nm,光学显微镜技术,普通光学显微镜 荧光显微镜 相差显微镜 激光扫描共焦显微镜,普通光学显微镜,HE染色:苏木精染核蓝;伊红染质红,荧光显微镜,常用荧光染料: 吖啶橙:DNA-绿色; RNA-红色 DAPI :DNA兰色 碘化丙
2、啶(PI):DNA红色 异硫氰酸 (FITC):黄绿色 罗丹明 :红色,相差显微镜,物镜里增加相板,聚光镜上增加环形光阑,相位差转变为振幅差。,相差光圈(位于聚光镜上)应与不同放大倍数的物镜匹配 phLX4 ph1 phCX20 X10 ph2 X40 BF(明视野),激光扫描共焦显微镜,在荧光显微镜的基础上加上激光扫描装置,以单色激光为光源,使样品被激发出荧光,通过计算机图像处理,从而得到微细结构的荧光图像,电子显微镜技术,透射电镜 扫描电镜 分析电镜 超高压电镜 电子枪发射电子作为电镜的照明光源 样品:超薄切片、冷冻制样、负染色、真空渡膜、冷冻蚀刻,电子显微镜,扫描电镜,第二章 细胞的物质
3、基础,1原生质(protoplasm):细胞中的生命物质,由细胞质(包括质膜)和细胞核组成。 2元素组成 主要元素:C.H.O.N 4种 少量元素:S.P.Na.K.Ca.CL.Mg.Fe 8种 微量元素:Cu.Zn.Mn.Co.I.Br.F.Si.Sr.Ba 10种,化合物,有机化合物,无机化合物,水,无机盐,自由水,:细胞生命活动的内环境 细胞各种代谢反应的场所,:维持渗透压和pH,保障细胞正常生理活动,糖 类,脂 类,蛋白质,核 酸,维生素,分子量巨大、结构复杂、具有生物活性生物大分子(biological macromolecules),结合水,:与许多分子结合构成细胞结构的组成部分,
4、一、小分子物质,(一)水 (二)无机盐和离子 (三)有机小分子,二、生物大分子,(一)蛋白质 1. 蛋白质的结构 (1)氨基酸(amino acid),(2)多肽链(polypeptide chain) 肽键: 氨基酸残基: 主链和侧链: 主链:指各碳原子间以肽键相接的长链。 侧链:指与各氨基酸残基相连的R基团。,(3)蛋白质的分子结构, 一级结构:氨基酸排列顺序 二级结构: 三种:a螺旋结构(右手螺旋),折叠片层,三股螺旋。 三级结构: 四级结构:,返回 请等候动画,返回 请等候动画,2. 蛋白质的类型,按蛋白质分子组成 单纯蛋白质:分子组成除氨基酸没有别的组分。如:清蛋白、组蛋白等 结合蛋
5、白质:由蛋白质和其它化合物结合而成。 如:糖蛋白、核蛋白、脂蛋白、色蛋白、 磷蛋白,按分子形状 球状蛋白质:分子呈球状或椭球状, 多数蛋白为球状蛋白。如:酶蛋 白、激素蛋白、抗体蛋白等 纤维状蛋白:分子呈长纤维状。多属 结构蛋白,起支持作用。如:角 蛋白、胶原蛋白等,3. 蛋白质在生命活动中的作用 (1)结构和支持作用: (2)催化作用: (3)传递和运输作用: (4)运动功能: (5)防御作用: (6)调节作用:,(二)核酸:,1.核酸的化学组成:由核苷酸(nucleotide)组成。 3,5-磷酸二酯键,2.核酸的种类,3.DNA分子的结构与功能,(1)DNA的一级结构:脱氧核苷酸的排列顺
6、序。,(2)DNA的空间结构:基本形式是双螺旋结构。,含义:由两条方向相反的DNA单链互相平行以右手螺旋方向,沿假想轴缠绕而成的双螺旋结构分子。 磷酸和脱氧核糖位于双螺旋的外侧,形成DNA的骨架,碱基位于双螺旋的内侧。 特征数据:3.4nm螺距,10bp,d=2nm A=T,G=C; G+A=C+T,(3)DNA分子的功能,复制(replication):由一个亲代分子形成两个DNA分子的过程,每个子代分子都与亲代分子完全相同。 转录(transcription):以DNA为模板合成RAN的过程。,本节课重点: 各种显微镜的功能区别 DNA双螺旋结构模型 蛋白质的一、二、三、四级结构,实验一
7、细胞的化学成分,目的要求,1.掌握光镜的使用方法。 2.掌握生物绘图的方法。 3.了解细胞的某些化学成分在细胞内的分布 4.学习显示细胞内某些化学成分的方法,1、照明部分 2、光学部分 3、机械部分,生物绘图,铅笔 线表示细胞结构轮廓 点表示明暗程度 图全称位于图的正下方 放大倍数标于图全称下 标注线水平向右引,(1040),碳水化合物的观察,用刀片切取马铃薯块茎一小片,制作临时装片 低倍镜观察-可见薄壁细胞中充满大小不等的卵圆形或圆锥形的颗粒,即淀粉粒 高倍镜观察-淀粉粒具层纹结构 吸革兰氏碘液1滴于盖片一测-另一侧用吸水纸吸去多余的水分,使碘液很快渗入细胞-上述颗粒遇碘液即变蓝色。,核酸的观察,甲基绿染液可特异对DNA进行着色。 哌洛宁染液可特异对RNA进行着色。 取材洋葱鳞叶内表皮1片浸入甲基绿染液染色5min 自来水洗去多余染液 浸入哌洛宁染液染色15min 自来水洗去多余染液制作临时装片 镜检观察-细胞核染成蓝绿色,细胞质染成粉红色,过氧化氢酶的测定,生土豆-加2-3滴2%H2O2-有气泡产生 熟土豆-加2-3滴2% H2O2 -无气泡产生 H2O2 H2O+O2,过氧化氢酶,作业:,1.绘甲基绿-哌洛宁染色后的洋葱鳞叶内表皮细胞。,
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