2.2.2_动物细胞融合与单克隆抗体-精选文档.ppt
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1、 2002年12月30日, 两场筹备了10年的“太空 婚礼”首次在神舟四号飞船上举行,植物细胞“新 人”黄花烟草和革新一号烟草叶肉细胞原生质 体,动物细胞“新人”是小鼠B淋巴细胞和骨髓瘤 细胞,两批新人同时在 “产房”电融合仪内孕育 新生命。 “太空婚礼” 这两场这两场“ “太空婚礼太空婚礼” ”实质是哪两项细胞工程技术实质是哪两项细胞工程技术 植物体细胞杂交技术动物细胞融合技术 (1) (1) (2) (3) (4) (5) 植物体细胞杂交过程示意图 一.动物细胞融合 请同学们阅读课本P52动物细胞融合 思考: 什么是动物细胞融合? 动物细胞融合的原理、方法、过程及结果 。 动物细胞融合技术
2、的应用。 A细胞 B细胞 人工诱导 1.1动物细胞融合的概念 杂交细胞 动物细胞融合(也称细胞杂 交):是指两个或多个细胞融 合形成一个单核细胞的过程。 一、动物细胞融合 细胞膜的流动性 灭活病毒、PEG、电激等 融合后的细胞进行有丝分裂 ,形成完整的杂交细胞 诱导的手段? 融合后细胞的类型? AB杂种细胞遗传物质 有什么特点? 三种AA、AB、BB(A、B) 含两种生物的遗传物质 1.2动物细胞融合过程 原理? 1.2动物细胞融合过程 为什么灭活的 病毒能作诱导剂 ? 灭活丧失感染性 保留融合活性 1.3动物细胞融合技术的意义和应用 强化巩固: 1.植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细 胞
3、壁? 酶解法,如纤维素酶或果胶酶 2.动物细胞融合时需要进行去壁处理吗?为什 么? 无需,因为动物细胞无细胞壁 3.植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的 方法有哪些? 离心、电激等物理方法;PEG等化学方法 5.植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再 进行组织培养形成完整的杂种个体,动物细 胞融合后能形成杂种动物个体吗? 不能 4.动物细胞融合能利用上述两类方法吗?还 有其他方法吗? 能 ,还可以利用灭活的病毒进行诱导 比较项 目 细胞融合 的原理 细胞融合的 方法 诱导手段用途 植物体 细胞杂 交 细胞膜的 流动性 纤维素酶、 果胶酶去除 细胞壁后诱 导原生质体 融合 离心、电刺 激、振动、
4、 聚乙二醇 克服远源 杂交不亲 和,获得 杂种植株 动物细 胞融合 细胞膜的 流动性 用胰蛋白酶 使细胞分散 后诱导细胞 融合 除应用植物 细胞杂交手 段外,还有 灭活病毒 获得杂种 细胞、 制备 单克隆抗 体 1.4 比较动、植物细胞杂交技术 【例1】能使动物细胞融合的特有的诱导因子是 ( ) A.离心 B.灭活的病毒 C.电刺激 D.振动 【例2】融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点( ) A. 具有原来两个或多个细胞的遗传信息 B. B.能无限增殖 C.可形成新个体 D.培养过程会贴 壁 【例3】动物细胞融合的作用中最重要的是( ) A.克服远源杂交不亲和 B.制备单克隆抗体 C.培育新物
5、种 D.生产杂种细胞 B B A 强调:强调:效应效应B B淋巴细胞是淋巴细胞是 能够产生抗体的能够产生抗体的B B淋巴细淋巴细 胞,下文将其简称为胞,下文将其简称为B B淋淋 巴细胞巴细胞 抗体:能够与抗原发生特 异性结合的免疫球蛋白。 能产生抗体的细胞是浆细 胞(即效应B细胞)。 二、单克隆抗体 B B淋巴细胞淋巴细胞 效应效应B B淋巴淋巴 细胞细胞 记忆记忆B B淋淋 巴细胞巴细胞 分化分化 抗体的传统生产方法 抗原 反复注射动物 从动物的血清中分离抗体 该法制备抗体的缺点: 产量低、纯度低,且抗 体的特异性差、灵敏度 低。 单克隆抗体!单克隆抗体! 能否用单个B淋巴细胞通过克隆形成的
6、细胞群来产生 单一类型的抗体呢? 读下面一段资料,找出单克隆抗体的概念 人们发现,在动物发生免疫反应的过程中,体内的B细胞 可以产生多达百万种以上的特异性抗体,但是每个B细胞只 分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的 单一抗体,必须用单个B细胞进行无性繁殖,即克隆。 2.1单克隆抗体的概念 单克隆抗体:单个B细胞克隆产生的化学性 质单一、特异性强的抗体 提示1:对B细胞进行细胞培养可行吗? 提示2:我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的? 问题:如何大量生产单克隆抗体?请尝试设 计一个方案。 2.2单克隆抗体的制备 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖 杂交瘤细胞
7、 动物细胞培养技术 设计方案: 动物细胞融合技术单克隆 抗体 既能产生特异性抗体, 又能大量增殖的细胞 19751975年英国科学家年英国科学家米尔斯坦米尔斯坦和和柯勒柯勒的实验的实验 为什么给小鼠注射特定的 抗原蛋白? 会有几种融合方式? 杂交瘤细胞是如何筛选出 来的?有何特点? 是否所有的杂交瘤细胞都 能产生专一性抗体? 如何大规模进行培养得到 大量的单克隆抗体? 多种杂交多种杂交 细胞细胞 灭活的病毒等手段灭活的病毒等手段 骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞B B淋巴细胞淋巴细胞 经免疫经免疫的小鼠的小鼠 提取 杂交瘤杂交瘤细胞细胞 第一次筛选第一次筛选 用特定的选 择性培养基 第二次筛选第二次筛选
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