最新7第七章重组DNA导入受体细胞-PPT文档.ppt
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1、转化过程中,这些分子同时被转移到宿主细胞内。 未连接的分子即使被细菌摄取,只有在特殊的条件下才能复制,寄主的酶可降解这些DNA片段。 自连的载体和错误插入的重组质粒可以进入宿主细胞进行正常的复制,一、转化方法,自然界中,转化并不是细菌遗传信息传递的主要方式,实验室中只有小部分的细菌可以很容易的转化。 正常条件下,大部分细菌包括大肠杆菌,只能吸收有限的DNA,为了提高转化效率,建立了一系列的转化方法:,供体菌游离DNA,供体菌DNA (转化因子),转化示意图,a. 热激法转化感受态细胞 b. PEG介导的原生质体转化 c. 高压电穿孔法转化 d. 显微注射法转化 e. 接合转化 f. 噬菌体转染
2、,大肠杆菌常用转化方法的比较,一)受体细胞应具备的条件,a. 限制性缺陷型RecB-,RecC-,hsdR-(外切、内切酶) b. 重组整合缺陷型RecA-(对于用于基因扩增或基因高效表达的受体) c. 具有较高的转化效率 d. 具有与重组体互补的遗传性状 e. 感染与寄生缺陷型 安全角度的要求。,二)大肠杆菌感受态的制备与转化,感受态细胞(Competent cells): 受体细胞经过一些特殊方法的处理后,细胞膜的通透性发生变化,成为能容许有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞(competent cells) 。,1、热激法转化感受态细胞,2、氯化钙法转化,在某些情况下,CaCl2只影响
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