最新guan-4-1细胞融合-PPT文档.ppt
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1、细胞融合概念,融合方法,融合过程,融合的影响因素,细胞融合,细胞融合(cell fusion):又称somatic hybridization or cell hybridization ,指在自然条件下或人工方法使两个或两个以上的细胞通过无性方式融合形成一个杂合细胞的过程。 它能重新组合两个亲本细胞的优良遗传信息,是研究细胞间遗传信息传递、基因在染色体定位、改良动物遗传特性及创造新的符合人类需要的新的细胞系极为有效的手段。 自发融合:受精过程,成肌细胞融合,巨噬细胞融合,体外培养系统中的细胞融合 诱发融合,一、 细胞融合的概念,1962年Okata发现仙台病毒可诱发艾氏腹水瘤细胞融合成多核细
2、胞体,开创 动物细胞融合的暂新领域。,Singer and Nicolsons Model of membrane structure: The fluid-mosaic model is the “central dogma” of membrane biology.,The core lipid bilayer exists in a fluid state, capable of dynamic movement. Membrane proteins form a mosaic of particles penetrating the lipid to varying degrees.,
3、The Fluid Mosaic Model, proposed in 1972 by Singer and Nicolson, had two key features, both implied in its name.,The chemical composition of membranes,A. Membrane Lipids: The Fluid Part of the Model,Phospholipids: Phosphoglyceride磷酸甘油酯and sphingolipids Glycolipids Sterols ( is only found in animals)
4、,Membrane lipids are amphipathic. There are three major classes of lipids:,An Overview of membrane functions,1. Define the boundaries of the cell and its organelles. 2. Serve as loci for specific functions. 3. provide for and regulate transport processes. 4. contain the receptors needed to detect ex
5、ternal signals. 5. provide mechanisms for cell-to-cell contact, communication and adhesion,细胞融合机理 细胞融合的关键:脂双层的接触靠近, 细胞桥形成, 胞质渗透细胞核融合。,胆固醇,磷脂,糖脂,寡糖,疏水a螺旋,鳌合蛋白,极性孔,蛋白分子,Hydrophobic 疏水的 Hydrophilic 亲水的,二、诱发细胞融合的方法,病毒,化学PEG,电融合,1.病毒促进细胞融合,病毒类融合剂是研究的最早的促融剂,一些致癌、致病病毒如疱疹病毒、天花病毒、副流感型病毒、副黏液病毒等,都能诱导细胞融合,但由于毒性
6、大,应用上收到很大限制。 仙台病毒(HVJ)是一类被膜病毒,诱导细胞融合的不是仙台病毒内部的RNA,而是它的外膜。 这一现象对你有何启示?,HVJ促融机制: 当病毒位于两个细胞间时,病毒表面spike上神经氨酸酶降解细胞膜上的糖蛋白,使细胞膜局部聚集在病毒周围,在高pH和Ca2+条件下局部细胞膜发生融合。,2.化学融合剂促进细胞融合 1975年Kao和Chayluk报道PEG(polyethylene glycol,PEG)可促进细胞融合, Pontecorvo报道PEG促融效率高于仙台病毒100-300倍。 PEG是一种多聚化合物,商品名卡波蜡Carbowax,分子量20020000,靠醚键
7、的联结使其分子末端带弱负电荷,目前已衍生达50多种。,聚乙二醇(PEG)介导的细胞融合,原理:PEG带有大量的负电荷,和细胞膜表面的负电荷在Ca2的连接下,形成静电键,促使异源的细胞膜间的粘着和结合,在高pH,高Ca2溶液的作用下,将Ca2和与质膜结合的PEG分子洗脱,导致电荷平衡失调并重新分配,使两种细胞膜上的正负电荷连接起来,进而形成具有共同质膜的融合体。,注意事项,1 PEG融合的关键是作用时间 2 PEG规格和纯度与融合效率有关 3 融合与细胞密度有关 4 融合液中加入少量CaCl2,即维持一定电导率,对细胞也有保护作用,3.电融合技术(Electroporation),3,注意事项,
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