2018年细菌革兰氏染色-文档资料.ppt
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1、一、实验目的,学习微生物制片、染色的基本技术 掌握细菌革兰氏染色及无菌操作技术 进一步观察细菌的基本形态,C.Gram(革兰)于1884年 发明的一种鉴别不同类型 细菌的染色方法。,二、实验原理,革兰氏染色,1、用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行初染,2、用碘溶液进行媒染,其作用是提高染料和细 胞间的相互作用从而使二者结合得更牢固。,3、用乙醇或丙酮冲洗进行脱色。在经历脱色后 仍将结晶紫保留在细胞内的为革兰氏阳性细 菌,而革兰氏阴性细菌的结晶紫被洗掉,细 胞呈无色。,4、用一种与结晶紫具有不同颜色的碱性染料对 涂片进行复染。例如沙黄,它使原来无色的 革兰氏阴性细菌最后呈现桃红到红色,而革 兰氏阳性
2、细菌继续保持深紫色,三、实验材料 1、菌种:大肠杆菌(E.C)、枯草杆菌(B.S) 2、染料:结晶紫、复红、碘液等 3、材料:95%酒精等,涂片风干固定初染水洗媒染水洗脱色水洗复染水洗干燥镜检,四、实验方法 (一)革兰氏染色,Smear preparation,Heat fixing,crystal violet stain wash with water,Staining,Counterstain with Safranin,注意事项:,(1)在涂片时不可过厚,否则在染色脱色时,都不易均匀, 固定时,不可过热,以载玻片不烫手为宜。 (2)严格掌握脱色程度,是革兰氏染色的关键步骤。如脱色 时间
3、太长,阳性菌会误为革兰氏阴性菌,时间不足,革 兰氏阴性菌会误为革兰氏阳性菌。 (3)在镜检时,以分散开的菌体的革兰氏染色反应为准。 (4)设定阴性和阳性对照,确保实验的可靠性。,五、思考题,1、讲述革兰氏染色的原理,并指出E.C和B.S分别属于革兰氏阳性或阴性? 2、做革兰氏染色涂片为什么不能过于浓厚?革兰氏染色成败的关键一步是什么? 3、当对未知菌进行革兰氏染色时,怎样能证明你的染色技术和结果的正确性?,实验三 真菌形态观察及 微生物菌落形态比较,一、实验目的,学习自制水浸片观察真菌形态的方法 观察丝状真菌和酵母菌的形态 比较细菌、真菌和放线菌的菌落形态,二、实验原理 真菌形态结构比细菌复杂
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