FISH技术在血液肿瘤中的应用-精选文档.ppt
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1、FISH的定义,荧光原位杂交(FISH)是20世纪八十年代在细胞遗传学、分子遗传学和免疫学相结合的基础上发展起来的新技术。它利用已知核酸序列作为探针,以荧光素直接标记或先以生物素或地高辛等半抗原标记后与靶DNA进行杂交,再通过免疫细胞化学过程连接上荧光素标记物,最后在荧光显微镜下观察杂交信号,从而对标本中待测核酸进行定性、定位和定量分析。,FISH技术原理,FISH技术原理,FISH技术原理,FISH技术原理,FISH技术原理,FISH技术原理,FISH技术原理,FISH的种类,间期FISH(Interphase FISH) 染色体涂染分析(Chromosome painting) 多色FIS
2、H(Multicolor-FISH) 反向涂染(Reverse painting) 比较基因组杂交(Comparative genomic hybridization),FISH探针的种类和用途,着丝粒探针 用于检测染色体数目异常如三体、单体等。 亚端粒探针 靠近端粒的200-300Kb为染色体特异性DNA,用于检测 涉及端粒的隐匿性易位。 染色体臂或整条染色体涂染探针(WCP) 用于检测染色体易位和标记染色体。 序列特异性探针 包括臂、带和基因探针等多种,用于检测基因缺失和重排。,血液肿瘤FISH检测常见探针类型,双色双融合探针(DC,DF),额外信号探针(ES),分离探针(BRK),FIS
3、H在血液肿瘤中的应用,检测样本可以是血液、骨髓、石蜡切片 诊断和鉴别诊断 治疗和预后分层 监测疗效(微小残留病灶检测) 识别移植后骨髓细胞来源,一、诊断和鉴别诊断,核型分析缺点: 有丝分裂象少或缺如 染色体质量低劣,显带不佳 染色体异常复杂 分子生物学检测不足: 常见的转录序列来设计引物,扩增的片段长度一般在100 700bp之间 mRNA剪切方式比较特殊,假阴性结果,易造成漏诊或误诊,一、诊断和鉴别诊断,FISH技术能弥补以上2种技术的不足之处 间期细胞上分析(无需中期分裂象),极大地提高了敏感性、准确性和可靠性。 对核型提示的染色体异常做进一步鉴定,从“正常核型” 中筛查隐匿的染色体畸变,
4、成为精确的染色体分析不可缺少的手段。 FISH探针的片段相对较长,常可达数百kb,甚至大于1Mb,跨越融合基因每一侧多个外显子区域,只要发生在这些区域的缺失或易位都能被检测到,极少发生漏检,假阴性率很低。,举例 男性46岁患者,2003.2.24内科急诊发现白细胞增高(25109/L) 。 骨髓显示粒系极度增生,红系、巨核系以及血小板增生尚可,NAP积分49分,核型分析结果为46,XY20。 随访3年,其白细胞始终维持在20-30109水平。,一、诊断,2006.5.4发现白细胞增高至170109,血小板511109,血红蛋白118g/dL。 骨髓象显示早幼粒细胞占6%,中幼粒细胞占13%,核
5、型分析未见分裂象。 BCR-ABL 210基因阴性,经单融合FISH探针证实骨髓59%细胞BCR-ABL融合基因阳性。 接受格列卫治疗,2006.9.7复查,FISH阳性细胞比例降低至7.4%,2006.10.23以后的复查结果FISH都为阴性。,一、诊断,其他常用于诊断的探针还有:PML/RARA,AML1/ETO,CBF,TEL/AML1等。 以CBF探针为例: 发生16号染色体倒位的细胞其荧光信号由2F变成1F/1R/1G。 有研究表明CBF探针对inv(16)导致的CBF-MYH11融合基因的检出率与分子生物学的方法相当。,一、诊断,一、诊断急性淋巴细胞白血病,急性淋巴细胞白血病,一、
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