最新最新2细菌感染的实验诊断-PPT文档-PPT文档.ppt
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1、,感染的诊断有赖于 从标本中检出病原体或检出病原体的可溶性抗原,或病原体的DNA 病人血清中检出病原体的抗体 本章主要讨论检出病原体的问题,第一节,实验诊断的目的与要求,进行病原学诊断 进行药敏试验,指导合理用药 用作流行病学调查, 追踪传染源 研究病原生物与感染的关系,一.目的,鲍氏痢疾志贺菌13型暴发,时间:1992年9月 发病:26名 死亡:10名 地点:某婴儿室 传染源:慢性携带者产妇 传播方式:通过污染操作台接触,鼠伤寒暴发,时间:1991年11月 地点:某婴儿室 发病:55名 死亡:23名 56件物品(被褥,尿布,奶瓶)中26件检出鼠伤寒沙门菌,二.诊断试验的选择,有价值的 快速简
2、便的 特异性和敏感性高的,可用的方法:,查病原体:直接涂片 分离,对纯培养物进行鉴定 查可溶性抗原: 用已知抗体 查DNA:分子生物学方法 查抗体: 用已知抗原 IgM IgG: 效价有4倍以上增高,三.细菌鉴定流程,双歧检索: 以某一试验分 表解: 用多种试验整体分析 数字编码: 将多种试验分别编码, 数字化后查表,革兰氏阴性杆菌 葡萄糖发酵,+ -,氧化酶,+ -,弧菌,肠杆菌,非发酵菌,A B C D E,甲 乙 丙 丁,+ + - - +,+ + + - -,- - + + -,- + - + +,组别 试验 代码 结果 结果代码 总值,1 A 4 - 0 1 B 2 - 0 C 1
3、+ 1,2 D 4 + 4 5 E 2 - 0 F 1 + 1,15 ,微量生化反应系统和自动化,各试验孔含不同试验的脱水底物 加入纯化的被检菌 孵育4-24h观察结果 人工读取根据编码资料判定菌种或 电脑读取,第二节,临床标本的采集与处理,一.标本采集的原则,早期,用抗菌药物前 根据病原体存在的部位采集相应标本 无菌技术,避免正常菌群污染,防止病原体播散 采用合适的方法,二.标本的处理,尽快接种到合适的培养基上 根据抵抗力选择保存和运输条件 厌氧菌 奈瑟菌 病毒,第三节,细菌的形态学检查,一.不染色标本,用悬滴法或压片 细菌是活的,可观察运动 加入特异抗体可抑制其运动 结合标本来源可作初步诊
4、断,如霍乱,梅毒 用相差或暗视野显微镜效果更好,压片,悬滴法,二.染色标本,革兰染色(Gram stain):紫色革兰阳性;红色革兰阴性. 注意细菌的大小,形状,排列以及着色的均一性 抗酸染色(acid-fast stain):红色抗酸阳性,蓝色抗酸阴性 荧光染色:更易观察,特殊染色可用于观察荚膜, 鞭毛等细菌的特殊结构,第四节,细菌的分离培养,一.细菌生长的要求,培养基:营养物质,pH7.4 气体: 需氧菌, 厌氧菌, 兼性厌氧 菌,微需氧菌 温度: 一般37C 时间: 一般1824h,二.培养基,1.对培养基的基本要求 足够的营养物质 合适的pH 无菌 澄清,2.培养基的种类,按培养基成分
5、分: 基础培养基: 满足一般细菌要求 营养培养基: 满足苛求细菌要求 鉴别培养基: 加有被利用物和指示剂 选择培养基: 加有抑制剂,能抑制非目的菌生长 特殊培养基: 满足特殊细菌要求,按培养基物理性状分: 液体:增菌 固体:加2%琼脂,平板用于分离纯种,斜面用于传代或保存细菌 半固体:加0.5%琼脂,用于观察动力,保存菌种,三.主要的接种方法,分区划线法:用于分离纯种,多次烧灼减少菌数,以获取单个菌落 连续划线:不要求单个菌落,用于保存或繁殖细菌 涂布:使细菌长成菌苔,可观察细菌被抑制情况或用于繁殖细菌 倾注平板:少量细菌混于琼脂中倒板,计数,分离纯种,四.细菌生长的表现,固体基: 菌落形成,
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