免疫组化技术简介及相关临床应用-PPT课件.ppt
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1、提 纲 1、背景知识简介 2、定义及基本原理 3、所用抗体及标本类型 4、常用染色方法 5、操作步骤及结果判断 6、临床应用 7、相关图片 7、开展该项目注意事项 背景知识简介 l 免疫组化技术是20世纪70年代初Sterb Berger在酶标法的基础上,以免疫学的抗原 抗体反应为理论基础发展起来的一门方法 学。 l 20世纪80年代该项技术在国外开始应 用于诊断疾病,国内比国外约晚10年,即 90年代开始运用于疾病的病理诊断。 l 最近20多年来,该项技术得到飞速发展,特 别是绝大多数抗体能够应用在福尔马林固定的石 蜡切片上,因而大大促进了它在临床病理学上的 应用。 l 从开始发展至今,该项
2、技术一直在基础医学 和临床研究中发挥重要作用,为疾病尤其是肿瘤性 疾病的诊断、鉴别诊断及发病机制的研究提供了 强有力的手段。 l 目前绝大多数大中型医院都开展了该项技术 检查,我院有待开展此项技术。 定义及基本原理 定义: 免疫组化,也称为免疫组织化学技术或 免疫细胞化学技术,是应用免疫学基本原 理抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性 结合的原理,通过化学反应使标记抗体的 显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素 )显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋 白质),对其进行定位、定性及定量的研 究。 基本原理: 抗体和抗原之间的结合具有高度的特异 性,免疫组织化学正是利用了这一原理。先 将组织或细胞中的某种
3、化学物质提取出来, 以此作为抗原或半抗原,通过免疫动物后获 得特异性的抗体,再以此抗体去探测组织或 细胞中的同类的抗原物质。然后再通过化学 显色方法将抗原抗体结合所在的部位显示出 来,从而达到对组织或细胞中的未知抗原 进行定性,定位或定量的研究。 有如下基本特点: 1、特异性强 2、敏感性高 3、定位准确 4、形态与功能相结合 所用抗体及标本类型 l所用抗体类型 常用的抗体为单克隆抗体和多克隆 抗体,单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆 分泌的抗体,应用细胞融合杂交瘤技术 免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后 的抗原直接免疫动物后,从动物血中所 获得的免疫血清,是多个B淋巴细胞克隆 所产生的抗体混合物
4、。 l所用标本类型: 主要为组织标本和细胞标本两大类, 前者包括石蜡切片(病理切片和组织芯片 )和冰冻切片,后者包括组织印片、细胞 爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组 织标本最常用、最基本的方法,对于组织 形态保存好,且能作连续切片,有利于各 种染色对照观察;还能长期存档,供回顾 性研究;石蜡切片制作过程对组织内抗 原暴露有一定的影响,但可进行抗原修 复,是免疫组化中首选的组织标本制作 方法。 常用染色方法 l 免疫组织化学技术按照标记物的种类不 同可分为: 1,免疫荧光法,标记物为荧光素,通 过荧光显微镜观察; 2,免疫酶法,以酶标记抗体,抗原抗 体反应后显色,通过光镜或电镜观察,目前 最
5、常用; 3,其它如亲和组织化学法、免疫铁蛋 白法、免疫胶体金法及放射免疫自显影法等 。 操作步骤 l流程简介如下: 常规石蜡切片脱蜡抗原修复(根据 需要)缓冲液冲洗(3min/2次)室温下 孵育5min缓冲液冲洗(5min/2次)室温 下孵育5min 缓冲液冲洗(5min/2次)滴 加一抗37孵育1-2小时缓冲液冲洗( 5min/2次)室温下孵育30分钟滴加二抗 室温下孵育1小时缓冲液冲洗(5min/2次 )滴加DAB液孵育3-5分钟自来水充分 冲洗复染脱水透明封片出诊断。 结果判断 (表达部位、检测物质及常用标记物) l表达部位: 细胞膜、细胞浆、核膜、细胞核、细胞 多部位及组织等; l检测
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