最新病理生理学9课件-PPT文档.ppt
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1、细胞的死亡方式,坏死,凋亡,正常细胞,细胞凋亡名称的由来,英国Aberdeen大学病理系 Kerr教授,1972年我和Wyllie在研究中观察到一种不同于坏死的细胞死亡方式,联想到秋日落叶,我们 就把它称作 Apoptosis,细胞凋亡的概念,凋亡(apoptosis): 由内外源因素触发细胞 内预存的死亡程序而导致的细胞死亡过程。,细胞坏死与凋亡的差异,细胞凋亡的生理意义,1、 确保正常发育、生长 如:指(趾)间隙的形成 2、 维持内环境稳定 如:清除受损、突变或衰老的细胞 3、 防御功能 如:使受到病毒感染的细胞凋亡,凋亡细胞的形态学改变,早期:胞浆脱水,胞膜空泡化,细胞固缩 晚期:染色质
2、边集,凋亡小体 最后:被附近的巨噬细胞吞噬消化,细胞凋亡时的主要变化,Normal Cell,Apoptotic cell,Scanning electron micrographs of apoptotic bodies,Phagosome,凋亡细胞的生化改变,内源性核酸内切酶激活 切割染色质DNA,Ca2+/Mg2+(+) ,Zn2+ (-) DNA片段化 内切酶在核小体切开DNA,形成180-200bp为倍数的 片段,电泳呈“梯状”条带 凋亡蛋白酶激活 Caspases (caspases:cysteine-containing asparate-specific protease) C
3、aspases的活性中心富含半胱氨酸,对底物天冬氨酸部位有特异的水解作用,内源性核酸内切酶的作用,H1,核心颗粒,连接区,180-200 bp,内源性核酸内切酶,Zn2+,Ca2+ Mg2+,鉴定细胞凋亡的常用方法,特性 推荐使用手段 说明,形态学 细胞表面改变 扫描电镜 微绒毛消失,芽状突起,可见凋亡小体 胞浆改变 相差显微镜 细胞皱缩,质膜变形,胞浆空泡 染色质凝聚核裂解相差显微镜或光镜 适用于组织切片 荧光显微镜 用结合DNA的染料标记,适用于培养细胞 流式细胞仪 定量测定DNA含量,细胞的大小和蛋白,适于 培养细胞 超微结构 透射电镜 完整的细胞器,胞浆空泡,核染色质凝聚裂解, 凋亡小
4、体适用于组织切片或培养细胞 生化改变 DNA裂解 琼脂糖凝胶电泳 梯状条带 磁场反转凝胶电泳 可测50bp或300bp的HMW片段 TUNEL法 原位缺口平移法 基因表达 可从mRNA、蛋白层次测定,可用免疫组化、 原位杂交、Northern印迹法等,细胞凋亡过程,凋亡信号转导 凋亡基因激活 细胞凋亡的执行 凋亡细胞的清除,凋亡诱导因素,+,受体,cAMP、Ca2+、神经酰胺,凋亡基因激活,DNase激活、Caspase激活,巨噬细胞吞噬分解凋亡细胞,凋亡发生途径与调控,细胞凋亡的诱发因素,细胞凋亡的抑制因素,细胞凋亡的相关调控基因,抑制凋亡基因:Bcl-2、EIB、IAP 促进凋亡基因: F
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