变态反性疾病的诊断方法-文档资料.ppt
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1、,湿疹,荨麻疹,眼结膜炎,支气管哮喘,变应性鼻炎,食物过敏,变应性疾病,变应性疾病是一个全球性的公共健康问题 在世界各地均很常见 全球发病率高达 40 并且患病人数仍在继续增加,粗略估计 变应性疾病的发病率 正以每10年 23 倍的速度增加,IL-12,IL-10,-,-,IL-12,+,-,IFN-,IL-13,IL-4,+,+,IgE,allergen,Mast cell,B cell,Th2 cell,Th1 cell,Eosinophil,inflammatory mediators,IL-3, IL-4,IL-6, IL-9,allergen,Dendritic cell,Dendr
2、itic cell,bacteria,viruses,IL-3, IL-5 GM-CSF,I型变态反应,机制,IgE,IL-4,IL-5,Allergic response,Eosinophils,CD4,APC,CD80/86,Th2,T cell,Allergen,CD3,HLA,CD28,B-cell,+,+,Th3,IL-10,TGF-,b,-,-,Th1,IgG,IFN-g,B-cell,+,IT,IT,-,Durham, AAAAI, NY, 2002,Mechanism of type 1 Allergy related to spec allergy vaccine (IT),
3、(一)变应原检测 变态反应性疾病由变应原所引发,因此确定致病的变应原对防治此病有着十分重要的作用。 皮肤试验(简称皮试) 血清中特异性IgE(sIgE ) 检测吸入性过敏原,如尘螨、猫皮屑、犬皮屑、树花粉、草花粉、真菌和少数其他途径进入的药物(如青霉素等),变态反应性疾病的诊断方法,1.皮肤试验,问世于1909年,具有简单、快速、低花费和高敏感性的特点,因而至今仍可作为变态反应疾病变应原诊断不可缺少的重要手段。皮肤试验主要分为皮内试验和点刺试验两种 。,(1)皮内试验,是目前应用最广、结果较可靠、测试剂量控制较严格的一种试验方法,也是皮肤试验的经典方法。近年来,由于此法较繁琐,有一定痛感,不适
4、合于小儿患者,已逐渐被点刺试验所取代。,(2). 点刺试验 它是将抗原导入皮肤更浅表水平的一种简便的皮肤试验。,然后用消毒的点刺针在滴有抗原的皮肤中央进行点刺。点刺针是定型设计的,该针长3cm左右,端部针尖长1mm,以柄肩限制针刺皮肤的深度。用该针在皮肤上垂直压破表皮,1秒后将针提起,随即擦去皮试液。20分钟左右观察结果。试验时应同时作阴阳性对照。,在受试者前臂曲侧经消毒的 皮肤上,滴一滴变应原浸液,组胺当量级别: 以变应原及组胺所致丘疹面积比而定其反应级别,组胺所致丘疹面积,无反应或与阴性对照相同者为(-),为组胺丘疹25%- 50%者为(+),50%- 100%者为(+),100%- 20
5、0%者为(+),200%以上者或 出现伪足者为(+),以(+),或以上判定阳性,运用点刺试验,受试者几乎没有疼痛,小儿患者也能接受,且快速、简便,适合于一次进行多个变应原的测定。 它所采用的变应原制剂稳定期长。 点刺针若操作正确,皮肤不会出血,而且深度一致,易于自身或异体对照。 皮试液立即被擦去,其进入皮肤的量和作用时间比较一致,用量易于控制而且节省。,不会出现非特异性的皮肤反应、具有特异性高、重复性和对比性好等优点,并且点刺试验几乎不会出现全身反应。 由于点刺试验不向皮内用力推入皮试液,避免了对皮肤的刺激,所以假阳性结果很少,与其他检测特异性变应原的试验符合率较高,因此,有替代皮内试验法的趋
6、势。 但由于点刺试验敏感性较皮内试验差,因而所需用的变应原浓度比皮内试验高出100倍。,皮试有时可出现假阳性和假阴性反应 假阳性的原因有: 变应原浓度太高; 变应原本身含有大量组胺或促组胺释放的物质; 溶剂的非特异刺激,如pH和渗透压有偏差,或甘油浓度过高; 患者皮肤敏感性过高,如划痕症阳性者。,假阴性的原因有: 受试者年龄过大或过小; 皮试变应原效价降低或注入变应原剂量太少; 药物因素的影响,如皮试前应用抗组胺类药物; 近期刚发生过强过敏反应,患者体内的过敏性抗体处于暂时“耗竭”状态。,国外目前推广将各种已包被了不同变应原并密闭包装的点刺器具,使用时只要打开包装,无需再滴加变应原,并备有阴阳
7、性对照。这种试验被称之为“干点刺试验”。该试验操作极为方便,且由于变应原处于干燥状态而不易被降解,故有效期长。,近年来强调变应原的标准化,即皮试液组分和各组分间的比例、含量、活性均恒定。随着分子克隆技术的发展,已有重组变应原问世,使皮试质量更加完善。,2. 血清特异性IgE检测,特异性IgE(sIgE)的测定在变态反应性疾病体外诊断中占有重要地位,现已被广泛使用。由于血中IgE含量甚微,仅为血中IgG的十几万分之一,sIgE含量则更微,因此采用一般的免疫学方法并不能检测到sIgE,需采用由标记上同位素或酶的抗人IgE抗体(作为二抗)以及固相化的各种变应原所建立标记免疫分析技术进行测定。,sIg
8、E固相化的变应原,变应原- sIgE复合物标记的抗人-IgE抗体,固相化的变应原-sIgE-标记的抗人IgE抗体的复合物,若标记物为同位素,则应用-计数仪测定结合的同位素活性;若标记物为酶,则通过酶催化底物产生的颜色,或发光(包括荧光),再经特定仪器灵敏地进行检 测。,sIgE检测的优点是: 不受对症治疗用药的影响,也不受过敏症状的干扰; 适用于皮试呈现假阳性的划痕症患者、严重皮炎不能作皮试者以及皮肤反应差的老年人及3岁以下儿童; 没有用昆虫、动物皮屑等变应原作皮试时产生的全身不适感。,缺点是: 费用较昂贵,需一定设备;费时,一般需一天时间才能得出结果; 血清中存在非IgE抗体,如脱敏治疗过程
9、中所产生的IgG类阻断抗体也可与变应原结合,干扰了IgE抗体与变应原的结合; 不是所有的变应原都适用,如药物和细菌等并不适用;,方法种类繁多,有酶免法、荧光酶免法、化学发光法等;所采用的固相化变应原的固相载体有96孔塑料板、圆形纸片、微孔薄膜、内含多孔弹性纤维素粒的帽状新型载体和蛋白芯片等;所用的结合抗人IgE抗体(作为二抗)的酶有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、半乳糖苷酶和尿素酶等;应用的抗人IgE来源也不同,有单克隆抗体、多克隆抗体(包括从马、羊、兔来源)。,由于以上差异,以及抗人IgE抗体的亲和力和效价不尽一致,各厂家又备有自己的标准品,因此所得的结果差异可很大,可比性尚不够满意。不同公司的
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