最新:分子分型在医院感染控制中的作用-文档资料.ppt
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1、分子分型(分子流行病学研究) 从核酸分子水平上分析医院感染的发生、发展规律及机理, 更加准确有效地进行医院感染管理控制,已成为当前国际医 院感染管理研究中的重要方向。 从患者分离株到病区周围环境株的比较分析; 从外源性感染到内源性感染 从某一医院的医院感染暴发到大范围甚至世界 范围的感染菌株流行变迁; 基因多态性分析技术已成为医院感染监测控 制的高水平研究领域。 1 微生物室在医院感染中的作用 accurately identifying nosocomial pathogens detecting unexpected antimicrobial-drug resistance epidem
2、iologic typingepidemiologic typing Pfaller MA et al. The clinical microbiology laboratory and infection control: emerging pathogens, antimicrobial resistance, and new technology. Clin Infect Dis 1997;25:858-70. 鉴定 特殊耐药菌的 检出 流行病学分型 2 PFGE(PFGE(脉冲场凝胶电脉冲场凝胶电 泳泳) ) RAPD(RAPD(随机扩增随机扩增DNADNA 多态性多态性) ) REA
3、(限制性酶切) ribotyping (核糖体分 型) 分子分型 基因分型 分子流行病学 研究 3 1、脉冲场凝胶电泳(PFGE) 制备琼脂糖栓块制备琼脂糖栓块 消消 化化 酶酶 切切 脉冲电泳脉冲电泳 结果解释结果解释 4 消化、释放出DNA PFGE原理 5 Enzyme酶切 PFGE原理 约520个、长度10 800kb的大片段DNA 6 Tenover FC.et al.J Clin Microbiol,1995;33(9):22332239 7 脉冲电泳 PFGE原理 8 原理: DNA 常规凝胶电泳 脉冲场凝胶电泳 9 时间消耗时间消耗 从分离菌株到出结果平均从分离菌株到出结果平均
4、 2.5 2.5 天天 标本准备、细胞裂解第标本准备、细胞裂解第 一天一天 酶切第二天酶切第二天 染色、拍照第三天染色、拍照第三天 PFGE原理 染色、拍照 10 11 PFGE结果判读 目测法: 按美国疾病控制和预防中心(CDC)Tenover等人推荐的方 法判读。 图谱完全相同的定为一个型,彼此之间相差一个带的定 为同一型的不同亚型,相差23个带的认为亲缘关系密 切,相差46个带的认为可能相关,条带相差7个以上的 认为无亲缘关系。并随机地选择不同的字母如A、B、C、 D等的字母顺序分型。 聚类分析 计算机输入SPSS,做树状图 12 PFGE同源性分析 13 PFGE特点: DNA原位提取
5、法,减少了断裂 利用细菌全基因组信息 细菌分型金标准 14 2、RAPD(随机扩增DNA多态性) 1990年 Williams: RAPD Welsh:AP-PCR 本质上相同 引物: “短” 、“单一” 和“ 非特异性”,一般9 10bp 扩增条件:“非严格性” 退火温度一般较低,25 35 15 ESHWAR MAHENTHIRALINGAM.et al.J Clin Microbiol,1996;34(5):11291135 16 nESHWAR MAHENTHIRALINGAM.et al.J .et al.J Clin Clin MicrobiolMicrobiol,1996;34(
6、5):1129,1996;34(5):112911351135 17 nESHWAR MAHENTHIRALINGAM.et al.J .et al.J Clin Clin MicrobiolMicrobiol,1996;34(5):1129,1996;34(5):112911351135 18 分子分型在医院感染控制中 的作用 19 Special Issue New Technology for Detecting Multidrug- Resistant Pathogens in the Clinical Microbiology Laboratory Lance R. Peterson
7、* and Gary A. Noskin* *Northwestern Memorial Hospital and Northwestern University Medical School, Chicago, Illinois, USA EID, 2001, 7: 30620 Northwestern Memorial Hospital, Chicago 700-bed, university-affiliated medical center 出院:39,000/年 急诊:56,000例/年 门诊量:260,000/年 21 分型确认后及干预效果 P=0.002 LR Peterson
8、et al, EID, 2001, 7: 306 5.79 22 指标 1.the total number of nosocomial infections per 1,000 patient days每千住院日医院感染 数 2.the number of patients with nosocomial infections per 100 patient discharges 每100出院病人医院感染病人数 (percentage of patients with nosocomial infection) (医院感染病人百分比) 23 感染控制工作小组成员: We formed a p
9、ermanent, integrated infection control and prevention program that fully incorporates Hacek DM et al. Am J Clin Pathol 1999;111:647-54. infection control personnel, infectious disease personnel, pharmacy personnel, clinical microbiology personnel into a single working group to minimize hospital infe
10、ctions. 感染控制 感染性疾病 药学 临床微生物 24 资料收集方法(Methods for data collection): review of microbiology reports review of patients medical records, direct observation of medical and nursing practice, active surveillance of rectal cultures of patients in nursing units for high-risk patients, evaluation of suspect
11、ed nosocomial infections reported by health-care providers. 查阅微生物报告 查阅病史记录 对医护人员操作的直接 观察 高危病人直肠培养的动 态连续观察 对上报的可疑医院感染 的评估鉴定 由三位专职感染控制人员对资料进行汇总分析,并制 定出相应控制措施,并在医院感染控制和预防部门主管的指 导下实施。 25 Two interventions: a molecular typing laboratory a weekly planning meeting infection control diagnostic medical micro
12、biology (molecular epidemiology) Pharmacy and infectious diseases 两个主要的干预措施: 分子分型 周会 包括以下方面的代表 : 感染控制 微生物诊断(分子 流行病学) 药学 感染性疾病 26 周会内容: 医院感染动向(短 期、长期) 感染控制专职人员 和微生物实验室的 工作 决定需要做的调整 需分型的病原体与 主管讨论决定 weekly meetings: the ongoing short- and long- term trends in nosocomial infections within the center act
13、ivities of the infection control professionals and microbiology laboratory personnel; any needed changes were determined. The organizational structure for selecting microbes for typing was shared by the medical directors of infection control and clinical microbiology 27 需基因分型的微生物: routinely genomica
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