实验七细胞骨架观察-精选文档.ppt
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1、实验目的,掌握细胞骨架的显示方法 掌握荧光显微镜的使用方法 了解荧光显微镜下细胞骨架的基本形态结构,背景知识,常用荧光探针介绍,狭义的细胞骨架指细胞质骨架,包括微丝、微管和中间纤维。 广义的细胞骨架包括细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞外基质。,细胞骨架,2019/1/24,微管,2019/1/24,微丝,2019/1/24,中间纤维,背景知识,S.D.Pone用考马斯亮蓝染人皮肤成纤维细胞的细胞骨架获得成功。1982年上海植物生理所陈梓卿采用植物细胞为材料也获成功。实践证明这是一种简单易行的方法。 当细胞用适当浓度的triton X -100溶液(聚乙二醇辛基苯基醚,一种非离子去垢剂)
2、处理,能够溶解质膜结构中及细胞内许多蛋白质,而微丝束结合得比较紧密,不容易被去除 ,经固定和染色后,可在光镜下观察到由微丝组成的纤维束。,细胞骨架研究中常用药物,实验原理,鬼笔环肽(phalloidin) 是从一种毒性菇类中分离的剧毒生物碱,它同细胞松弛素的作用相反, 只与聚合的微丝结合, 而不与肌动蛋白单体分子结合。它同聚合的微丝结合后, 抑制了微丝的解体, 因而破坏了微丝的聚合和解聚的动态平衡。 由于鬼笔环肽非常特异地结合并稳定聚合态肌动蛋白, 因而对肌动蛋白的动态平衡造成严重影响. 此外, 较高浓度的鬼笔环肽对细胞有毒害作用. 因此, 用鬼笔环肽标记微丝并不是用于研究活体细胞的理想方法.
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