性传播疾病的实验室检测-PPT课件.ppt
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1、一、概述-梅毒病原体 n(一)、名 词 n由梅毒螺旋体感染引起的一种慢性全身性性传播疾病 n是我国卫生部规定的重点防治性病之一 n中华人民共和国传染病防治法规定的乙类传染病 n世界卫生组织列为世界上最常见的50种传染病之一 n梅毒螺旋体(Treponema pallidum,TP ) n是梅毒的病原体,因其透明,不易着色,故又称苍白螺 旋体 n(二)、免 疫 n以细胞免疫为主,体液免疫只有一定的辅 助防御作用 n当螺旋体从体内清除后可再感染,而且仍 可出现一期梅毒症状 n此病周期性潜伏与再发的原因可能与体内 产生的免疫力有关 n(三)、抗 原 n1表面特异性抗原:刺激机体产生特异凝集抗体及密螺
2、 旋体制动或溶解抗体,后者加补体可溶解螺旋体 n2螺旋体内类属抗原:可产生补体结合抗体,与非病原 性螺旋体有交叉反应 n3,螺旋体与宿主组织磷脂形成的复合抗原:当螺旋体侵 入组织后,组织中的磷脂可粘附在螺旋体上,形成复合 抗原,此种复合抗原可刺激机体产生抗磷脂的自身免疫 抗体,称为反应素(Aegagin),可与牛心肌或其他正常 动物心肌提取的类脂质抗原起沉淀反应(康氏试验)或 补体结合反应(华氏试验) 二、检测方法-病原体检查 n梅毒螺旋体检查是诊断早期梅毒的最佳方 法。 n诊断一期梅毒、二期梅毒时,可取患者的 渗出液或淋巴结穿刺术得到的组织液,在 暗视野显微镜下观察螺旋体的特征性形态 和运动
3、方式. n病原学检查的主要方法有暗视显微镜检查 、镀银染色法和直接荧光法 1.暗视野显微镜检查、镀银染色和荧光抗梅毒螺旋体单 克隆抗体等检查方法,直接镜检到梅毒螺旋体,在临 床可确诊梅毒,且具有快速、方便、易操作的特点。 暗视野显微镜检查已被世界卫生组织指定为性病实验 室必备项目之一。 2.螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法,对于患 者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都 有十分重要的意义。 3.如未见到梅毒螺旋体,并不能排除患梅毒的可能性, 暗视野显微镜检查 镀银染色 检测方法-血清学检测 根据检测所用抗原不同,临床血 清试验分为两大类: 1.非梅毒螺旋体抗原血清试验 2.梅毒螺
4、旋体抗原血清试验 检测方法-非梅毒螺旋体血清试验 n性病研究实验室试验(VDRL) n不加热血清反应素试验(USR) n血浆反应素环状卡片试验(RPR、 TRUST) 检测方法-非梅毒螺旋体血清试验 n所有的非梅毒螺旋体血清试验的抗原基本 成分都一样,其基本成分是心磷脂 、卵磷 脂和胆固醇 n抗原抗体结合形成复合物 凝集成网状沉淀 颗粒 被肉眼所见 n上述方法的敏感性和特异性都基本相似 RPR结果 TRUST结果 检测方法非梅毒螺旋体血清试验临床意义 n非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、敏 感性和特异性较好。适用于大量人群的筛查。 n早期梅毒硬下疳出现1周-2周后,血清可呈阳性 。 n经
5、治疗后血清滴度可下降并阴性,故可作为疗效 观察、判愈、复发或再感染的指征。 检测方法-非梅毒螺旋体血清试验特点 n前带现象 指非梅毒螺旋体抗原血清试验中,有时血清中 存在高浓度的抗体时出现的弱阳性、不典型或阴 性反应的结果,而临床上又象二期梅毒,此时将 血清稀释后再进行试验,出现了阳性的结果,该 现象称为前带现象。 检测方法-梅毒螺旋体血清试验 采用梅毒螺旋体作抗原,是特异性的抗原体 反应。 n梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA) n梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TP-PA) n荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)、 n梅毒螺旋体酶联免疫试验(ELSA-TP) n梅毒螺旋体蛋白印迹试验(W
6、B-Test) 梅毒螺旋体血清试验的临床意义 n作为非梅毒螺旋体抗原血清试验(如RPR等)初筛阳性标本 的确证试验。 n梅毒患者经过抗梅治疗后,ELSA、TPPA试验仍可阳性 ,故TPPA试验阳性不能作为疗效观察的指标。 nELSA、TPPA阳性不能区分既往感染和现症感染,应结 合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行诊断。 梅毒血清假阳性反应 n技术性假阳性反应:如实验室操作错误,标本溶 血等,如重复试验,无梅毒患者血清试验成为阳 性。 n生物学假阳性反应:因非螺旋体抗原血清试验是 非特异性的,在其它一些疾病,尤以感染性疾病 ,也可释放心拟脂至血液中,产生反应素,如麻 风、麻疹、疟疾、传染性肝炎、
7、病毒性肺炎、传 染性单核细胞增多症,系统性红斑狼疮,非典型 性肺炎、甚至妊娠都可出现阳性,但这类患者血 清反应滴度低,很少超过1:8。而且半年内渐转 成阴性。另外可用特异性的梅毒血清反应证实。 如用FTAABS试验 假阴性反应 n在梅毒螺旋体感染后12周内可呈阴性反 应 n梅毒螺旋体感染不久即开始治疗 n晚期梅毒患者的血清中反应素含量低,敏 感性低的梅毒血清试验易出现阴性反应 n在二期梅毒时RPR试验也可出现阴性反应 ,前带现象(prozone phenomenon) 血清学检测的几个特点 n在最初的两周可能是阴性结果 nFTA、TPPA和ELISA在所有阶段都最敏感 nVDRL和RPR在三期
8、梅毒期可能为阴性 nVDRL-CSF仅用于诊断神经性梅毒 单击此处编辑母版标题样式 单击此处编辑母版副标题样式 *20 淋球菌实验室诊断技术 概况-病原学 n淋病是指由淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae,简 称淋球菌)引起的各种化脓性感染,是一种经典的常 见的性传播疾病. n淋球菌为革兰阴性双球菌,大小约0.60.8m。通 常成对生长,两菌接触面平坦。 n淋球菌与奈瑟属的另一种致病菌脑膜炎球菌及其他 共栖奈瑟菌在生物学上有许多相似性,可通过生化 特性加以鉴别。淋球菌原发性感染部位主要为男性尿道或 女性宫颈管内膜 概况-流行病学 淋病的传播途径有以下二种: 1)直接性接触感染
9、:成人淋病几乎全部通过性 接触感染。 2)间接接触感染:儿童可通过污染了淋球菌的 物品间接感染。新生儿可通过母亲产道分泌物 间接感染。 淋病的实验室诊断方法 n直接显微镜检查,观察淋球菌细胞; n分离培养淋球菌; n非培养技术检测淋球菌细胞成份如抗原 或DNA(EIA, PCR/LCR) 标本的采集和运送 n 取材的部位 年龄 性别 性接触方式 临床表现 n取材拭子 藻酸钙拭子 普通棉拭子 涤纶拭子 标本的采集和运送-取材部位 n男性 异性恋者:采集尿道标本,有口淫史者加取咽部标本; 同性恋者: 采集尿道、直肠及咽部标本. n女性 采集宫颈标本,必要时从尿道、直肠、咽部、前庭大腺和尿道 旁腺取
10、材; n幼女 采集阴道分泌物; n新生儿眼炎患者 采集眼结膜分泌物,对其母亲采集宫颈、尿道及直肠标本。 标本的采集和运送-取材方法 尿道 n男性患者 用手指从阴茎根部向尿道口方向挤压,有症状患者可挤 出脓液,用取样拭子蘸取脓液作涂片或培养。对挤压后无明 显分泌物时,采用男用取材拭子插入尿道 23cm,稍用力 转动,保留数秒钟再取出, 以采集到粘膜上皮细胞。 n女性患者 可抵着耻骨联合轻轻按摩尿道口,挤压出分泌物。如果无 明显分泌物,可用同男性相似的上述方法取材。 标本的采集和运送-取材方法 宫颈 取材前用温水或生理盐水湿润扩阴器。应避免使用 防腐剂和润滑剂,因为这些物质对淋球菌有抑制作用 。仔
11、细检查阴道壁和宫颈,如果宫颈口外面的分泌物 较多,先用无菌棉拭清除过多的宫颈粘液。将一取样 拭子插入宫颈管内12cm,稍用力转动,保留10 30秒后取出。 标本的采集和运送-取材 n直肠 将取样拭子插入肛门23cm,从紧靠肛环边的隐窝 中取材。避免接触粪便。 n阴道 青春期前女孩可采集阴道标本。将取样拭子置于阴 道后穹窿1015秒,采集阴道分泌物。 n咽部 从咽后壁或扁桃体隐窝取材 标本的采集和运送-运送 n淋球菌的抵抗力弱,对热敏感,不耐干燥。取材后标本若 不能立即接种于选择性培养基上时,需采用运送系统。置 于非营养型运送培养基中的标本应在12小时内送到实验室 ,接种于选择性培养基,分离阳性
12、率可达90%以上。超过 24小时则分离阳性率下降。 直接显微镜检查 染色方法: 革兰染液 美兰染液 姬姆萨染液 荧光抗体 革兰染色为一传统方法,因简便、快捷及价廉、仍然 为最广泛采用的方法。革兰染色将菌分为二大类,即染 成紫色的革兰阳性菌及染成红色的革兰阴性菌。 直接显微镜检查的临床意义 n男性淋菌性尿道炎的尿道标本 敏感性及特异性可高达95%99%,具诊断价值。 n宫颈标本、无症状男性尿拭子及取自直肠的涂片时 敏感性仅4070%。 不推荐直接显微镜检查诊断直肠和咽部淋球菌感 染。 亦不能用于疗后判愈。如果在多形核细胞外见 到形态典型的革兰阴性双球菌,需做培养进行确证。 淋球菌培养 n培养法为
13、诊断淋病的金标准. n对女性淋病的确诊应做淋球菌培养 n从选择性培养基上分离出淋球菌即可诊断淋病。 n培养的敏感性81100%。 n培养的优点有: 特异性极高(100%); 可发现无症状淋球菌感染患者; 可确诊儿童性虐待; 可用于进一步作药敏试验; 可用于治疗后的判愈试验。 淋球菌培养-培养条件 n培养条件 : 35 36,含5%10% CO2,湿润(70%湿度)的环境。 CO2环境可由CO2培养箱、CO2产气袋及烛缸提供 。使用烛缸时,应使用白色、无芳香味的无毒性蜡烛 。在烛缸底部放些浸水棉球以保持一定的湿度。 n培养时间:2448小时 淋球菌培养-培养条件 淋球菌培养-观察结果 n培养24
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