DNA的粗提取和鉴定.ppt
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1、课题 DNA的粗提取与鉴定 染色体成分 蛋白质 RNA(少量) DNA 1.1.提取提取DNADNA的基本思路:的基本思路: 利用利用DNADNA与与RNARNA、蛋白质和脂质等在物理和化学、蛋白质和脂质等在物理和化学 性质方面的差异,提取性质方面的差异,提取DNADNA,去除其他成分。,去除其他成分。 苇 心 本 览 根 陋 泥 鸣 侈 乌 闷 钦 秆 屹 构 较 狠 棚 慑 咳 逼 扬 诡 声 遭 识 叼 夏 乒 队 另 滁 D N A 的 粗 提 取 和 鉴 定 D N A 的 粗 提 取 和 鉴 定 1 DNA DNA的溶解性的溶解性 DNADNA和蛋白质等成分和蛋白质等成分 在不同浓
2、度的在不同浓度的NaClNaCl溶液溶液 中溶解度不同中溶解度不同 利用这一特点,利用这一特点, 选择适当的盐浓度选择适当的盐浓度 就能使就能使DNADNA充分溶解,充分溶解, 而使杂质沉淀;而使杂质沉淀; 或者让其他成分溶解,或者让其他成分溶解, DNADNA析出析出 2.DNA2.DNA等大分子的理化性质等大分子的理化性质 DNA DNA不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液 DNA DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性对酶、高温和洗涤剂的耐受性 螺 狙 棘 盼 携 躁 生 彦 纤 备 思 恭 坯 壮 躁 贾 哑 特 轿 瞥 咐 郎 这 蓖 岁 鹤 绢 坎 澜 酌 道 疲 D N A 的 粗 提 取 和
3、 鉴 定 D N A 的 粗 提 取 和 鉴 定 2 DNADNA不溶于酒精溶液,不溶于酒精溶液, 但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。 将将DNADNA与蛋白质进一步分离。与蛋白质进一步分离。 DNA DNA不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液 DNA DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性对酶、高温和洗涤剂的耐受性 蛋白酶蛋白酶水解蛋白质,水解蛋白质, 对对DNADNA没有影响没有影响 高高 温温大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白质不能忍受60608080 而而DNADNA在在8080以上才会变性以上才会变性 洗涤剂洗涤剂溶解细胞膜,去除脂质和蛋白质溶解细胞膜,去除脂质和蛋白质 但对
4、但对DNADNA没有影响没有影响 蚜 侄 汗 拷 燥 甭 异 碉 有 默 逆 涪 把 罚 陌 搀 闻 亲 挽 溉 葵 视 悉 稼 动 能 兴 莫 爹 稿 陈 墟 D N A 的 粗 提 取 和 鉴 定 D N A 的 粗 提 取 和 鉴 定 3 3.DNA3.DNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定 1 1原理、方法和目的原理、方法和目的 基本原理基本原理方法方法目的目的 DNADNA在不同在不同浓浓浓浓度的度的NaClNaCl 溶液中的溶解度不同溶液中的溶解度不同 ,在,在0.14 mol/L0.14 mol/L的的 NaClNaCl溶液中的溶解度溶液中的溶解度 最低最低 溶于溶于NaClNaCl
5、 溶液中并溶液中并 稀稀释释释释 NaClNaCl溶液溶液为为为为2 mol/L2 mol/L时时时时,DNADNA溶解,而部溶解,而部 分蛋白分蛋白质发质发质发质发 生生盐盐盐盐析生成沉淀,通析生成沉淀,通过过滤过过滤过过滤过过滤 可可 除去部分蛋白除去部分蛋白质质质质及不溶于及不溶于NaClNaCl溶液的溶液的杂质杂质杂质杂质 当当NaClNaCl溶液稀溶液稀释释释释至至0.14 mol/L0.14 mol/L时时时时,DNADNA析析 出,出,过滤过滤过滤过滤 可除去溶于可除去溶于NaClNaCl溶液的部分蛋白溶液的部分蛋白 质质质质和其他和其他杂质杂质杂质杂质 DNADNA不被蛋白不被
6、蛋白酶酶所水解所水解加入嫩肉粉加入嫩肉粉 嫩肉粉中含木瓜蛋白嫩肉粉中含木瓜蛋白酶酶,水解蛋白,水解蛋白质质质质(酶的专专一性 ) DNADNA不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液加入冷却酒加入冷却酒 精精(95%)(95%) DNADNA析出,除去溶于酒精的蛋白析出,除去溶于酒精的蛋白质质质质 DNADNA可被二苯胺染成可被二苯胺染成蓝蓝蓝蓝 色色 加入二苯胺加入二苯胺 ,并沸水浴,并沸水浴 鉴鉴鉴鉴定定DNADNA 高温DNA耐高温 DNA和蛋白质对高温耐受性不同:蛋白质、DNA 热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受60 80的高温,而DNA在80以上才会变性。 DNA对洗涤剂耐受性 洗涤剂能够瓦解细
7、胞膜,但对DNA没有影响。 加入加入洗涤剂 喧 榷 巩 胖 侗 脑 翔 诣 口 慨 哆 姬 授 杨 俘 扰 仆 芦 恕 幻 蚁 神 球 毛 僻 桂 寅 江 稍 欺 诲 勘 D N A 的 粗 提 取 和 鉴 定 D N A 的 粗 提 取 和 鉴 定 4 1)不同浓度NaCl中DNA溶解度不同。 2)DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同,DNA不溶于酒精,细 胞中某些蛋白质则溶于酒精。 3)DNA和蛋白质对酶耐受性不同:酶的专一性蛋白酶水解蛋 白质。但是对DNA没有影响。 4)DNA和蛋白质对高温耐受性不同:蛋白质、DNA热稳定性不同。 大多数蛋白质不能忍受6080的高温,而DNA在80以上
8、才会变 性。 5)DNA和蛋白质对洗涤剂耐受性不同:洗涤剂能够瓦解细胞膜, 但对DNA没有影响。 提取DNA的原理包括DNA的 两个方面 溶解性和耐受性 1.DNA的粗提取实验原理 濒 紧 关 缔 喂 魂 华 译 顷 喊 搁 镑 槽 吊 品 铝 锭 愉 耿 颧 蛇 赘 布 寡 娜 搽 豹 篮 胰 衍 赂 逞 D N A 的 粗 提 取 和 鉴 定 D N A 的 粗 提 取 和 鉴 定 5 2.2.实验材料实验材料 动物动物 鸡血细胞液的优点鸡血细胞液的优点 提醒:提醒:人和哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核,也没有人和哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核,也没有 DNADNA,不适于作为,不适于作
9、为DNADNA提取的材料,但却是提取血红蛋白的提取的材料,但却是提取血红蛋白的 理想材料。理想材料。 鸡血红细胞、白细胞中都有细胞 核,含大量的DNA,既经济又易取 植物:新鲜菜花、蒜黄、菠菜等。植物:新鲜菜花、蒜黄、菠菜等。 险 萨 蚜 艇 叁 禄 捧 藕 暂 敏 爽 旦 狸 剂 孜 念 寓 乔 腿 蚜 瞩 帽 光 膀 肩 蟹 丘 眠 烈 磨 迸 博 D N A 的 粗 提 取 和 鉴 定 D N A 的 粗 提 取 和 鉴 定 6 3、方法与过程 1).制鸡血细胞液 0.1g/mL柠柠檬酸钠钠100mL 活鸡鲜血180mL 500mL烧杯中,玻棒搅拌, 离心或静置沉淀。 离心或静置后去掉上
10、清液 血浆 血细胞 欺 窑 贮 疽 露 莽 你 仙 父 讹 亚 资 莱 澄 泊 铝 弓 饰 绑 岸 惧 钥 痔 词 退 挺 吾 援 惹 设 芋 鹿 D N A 的 粗 提 取 和 鉴 定 D N A 的 粗 提 取 和 鉴 定 7 方法步骤 加入物质 目的 1.制备鸡血细胞液 柠檬酸钠溶液 2.提取鸡血细胞细胞核物质 20 m1蒸馏水 幻灯片 18 3.溶解细胞核内的DNA 2 m1L 的NaCI溶液40mL 幻灯片 18 4.析出含DNA的黏稠物 蒸馏水 5.滤取含DNA的黏稠物 6.将DNA的黏稠物再溶解 2 molL 的NaCl溶液20 mL 7.过滤含DNA的NaCl 溶液 8.提取含
11、有杂质较少的 DNA 冷却的95的酒精50 mL 幻灯片 18 A:(1)向试管中加入0.015 molL 的NaCl溶液5mL (2)加入DNA (3)4 mL二苯胺试剂 9.DNA的鉴定 B:(1)向试管中加入0.015molL 的NaCl溶液5mL (2)4 mL 二苯胺试剂 用多层纱布过滤,含DNA的粘稠物留在纱布上。 用两层纱布过滤滤液中含有DNA。 席 俏 刚 敞 华 驼 侧 耕 缸 伊 是 簿 酉 领 窍 饯 而 诬 溜 抠 采 俱 贴 碧 坦 判 盟 趁 澈 倾 椿 秒 D N A 的 粗 提 取 和 鉴 定 D N A 的 粗 提 取 和 鉴 定 8 骗 准 绘 衬 饥 秽
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