[临床医学]苦参碱抑制宫颈癌HeLa细胞增殖作用及机制.ppt
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1、苦参碱对宫颈癌HeLa细胞的作用,摘自齐鲁医学杂志,2,摘要,目的: 探讨苦参碱对人宫颈癌HeLa细胞体外增殖的抑制作用及其分子机制。,3,摘要,方法: 以不同浓度(0.5, 1.0, 1.5,2.0 g/L)的苦参碱分别处理Hela细胞24、48、72h后,应用MTT法检测细胞增殖抑制率,WesternBlot方法检测培养48h细胞中真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)、4E结合蛋白1(4E-BP1)蛋白表达情况。,4,摘要,方法: 1. 0 g/L的苦参碱作用Hela细胞1、3、6、12 h后,Western Blot方法测其eIF4E、4E-BP1蛋白磷酸化水平。,5,摘要,结果: 苦
2、参碱明显抑制Hela细胞增殖,呈时间和剂量依赖性: 在相同时间内,随着苦参碱浓度的增加,Hela细胞的增殖抑制率明显升高(P0. 05); 2.0 g/L.苦参碱作用72 h对Hela细胞增殖抑制率最大,为(65. 30士2. 17)%。 在同一浓度时,随着苦参碱作用时间的延长,Hela细胞的增殖抑制率也明显升高(P0.05);,6,摘要,结果: 不同浓度苦参碱处理Hela细胞48h后,eIF4E、4E-BP1蛋白的表达均无明泉变化(P0.05)。 1. 0 g/L苦参碱作用于Hela细胞不同时间后,细胞eIF4E、4E-BP1蛋白磷酸化水平均降低,且呈时间依赖性(P0.01)。,7,摘要,结
3、论: 苦参碱可以明显抑制体外培养宫颈癌Hela细胞的增殖,其作用可能是通过抑制eIF4E以及4E-BP1的磷酸化,从而抑制蛋白翻译来实现的。,8,关键词,苦参碱; Hela细胞; 真核细胞翻译起始因子4E; 4E结合蛋白1,9,苦参碱(Matrine)化学分子式为C15H24N20,是从中药苦参的干燥根中提取的具有抗病毒、抗感染、平喘、增强机体免疫力、升高白细胞、保肝等广泛药理作用的活性物质。,简 介,10,近年来研究表明,苦参碱还具有明显的体内、体外抗肿瘤作用,在肝癌、胃癌、肺癌、白血病中均能明显抑制肿瘤细胞的增殖且没有化疗药物的毒副作用。但是,关于苦参碱的抗肿瘤作用的机制研究较少,尤其是苦
4、参碱对肿瘤细胞中蛋白质翻译通路的影响研究更少。,简 介,11,本研究选择人宫颈腺癌HeLa细胞作为研究对象,将调控细胞增殖信号通路中重要因子真核细胞翻译起始因子4E、4E结合蛋白1作为研究切入点,探讨苦参碱对体外培养的HeLa细胞增殖的影响及其可能的分子机制,以探讨其在妇科恶性肿瘤治疗中的应用价值。,简 介,12,材料与方法,实验材料 HeLa细胞株,由第三军医大学野战外科研究所保存。 苦参碱购白西安飞达生物公司。 DMEM高糖培养基、胎牛血清为Gibco公司产品。 四甲基偶氮唑蓝(MTT)由美国Sigma公司提供。 eIF4E、磷酸化的eIF4E ( p-eIF4E) 、 4E-BPl、磷酸
5、化的4E-BP1(p-4E-BP1)抗体均购自Cell Signa-ling公司。 肌动蛋白抗体购自北京四正柏生物科技有限公司。,13,材料与方法-实验方法,细胞株培养 HeLa细胞培养于含体积分数0. 10胎牛血清的DMEM高糖培养基中(下称完全培养基),置37、含体积分数0. 05 CO2、饱和湿度培养箱中培养,待细胞长至融合度为80%90%传代,所有实验均采用对数生长期细胞。,14,材料与方法-实验方法,MTT法检测HeLa细胞增殖抑制率 将HeLa细胞6103个/孔接种于96孔培养板,细胞贴壁后分别加入终浓度为0.5,1.0,1.5,2.0 g/L的苦参碱处理细胞,对照组加入等体积无血
6、清培养基,使每孔终体积为200L,空白调零组只加200L的完全培养基,每组设6个复孔。,15,材料与方法-实验方法,MTT法检测HeLa细胞增殖抑制率 继续培养24,48,72h后,加入5g/L的MTT 20L,37孵育4h,弃上清,每孔加入200L的DMEM,振荡使结晶溶解,上机检测490 nm波长处吸光度(A)值,计算细胞生长抑制率。细胞生长抑制率=(1一实验组平均A值/对照组平均A值)100%。实验重复3次,取平均值。,16,材料与方法-实验方法,Western Blot检测eIF4E、4E-BP1蛋白表达 HeLa细胞2105个/孔接种于96孔板,贴壁后分别用终浓度为0.5,1.01.
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