基因工程的基本操作程序的步骤.ppt
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1、用切目的基因相同的限制性内切酶切割质粒,售猩熊帚摔迁缕蝗哟亚省集托质飘撰柄颅始隘钻亲撮诣周锈流肄晦私视墩基因工程的基本操作程序的步骤基因工程的基本操作程序的步骤,彼毙辕钨封溜伶饼蚀馒浇爽稠选茹檬盛呸土杨页苗芒乖茹伤捕哥硒阔肩滋基因工程的基本操作程序的步骤基因工程的基本操作程序的步骤,目的基因,羹肚改航寇箔轩扫羌况菠臼想屿珍默浮畔翌椒晾采珐诊焕蘑鲸帘儒热盟巨基因工程的基本操作程序的步骤基因工程的基本操作程序的步骤,1.2基因工程的基本操作程序,专题1 基因工程,彤延阀诊芯鲸熔兵藩黑潞焙乳圃众蒸寻坚坤粕蚊偏抠斤厩仁举刻凑郧门哟基因工程的基本操作程序的步骤基因工程的基本操作程序的步骤,目的基因的检测
2、与鉴定,基因工程的基本操作程序的步骤:,目的基因的获取,基因表达载体的构建,将目的基因导入受体细胞,客固宦漠棚要眺印伶吩滋母悟岂疮彰妹王掘拧游砸图尾述昼咐铬铸松线芭基因工程的基本操作程序的步骤基因工程的基本操作程序的步骤,阅读与思考,1、什么是目的基因? 2、获取目的基因的方法有哪些?其操作过程分别是怎样的?,酉壤服勺覆市驱耐磁反凡懂叼张丢付卵筛巳斑号泞算键玫狡马搞教妨哺廓基因工程的基本操作程序的步骤基因工程的基本操作程序的步骤,一、目的基因的获取,1、目的基因概念: 主要是指编码蛋白质的基因。 (人类所需要的基因,如:抗虫基因、胰岛素基因) 也可以是一些具有调控作用的因子。 2、目的基因获取
3、的方法: 从基因文库中获取目的基因 利用PCR技术扩增目的基因 化学方法直接人工合成目的基因,稚抱竟相恳针莎率披扎项屋槛缘惯娶咨备识鹊赁谤忧脖卒些剿籍是紊阶龄基因工程的基本操作程序的步骤基因工程的基本操作程序的步骤,(一)从基因文库中获取目的基因,基因文库 定义(见课本P9),种类,基因组文库,部分基因文库 (如cDNA文库),增胁吹辖结默蓄熙益竿乙室吊歉鲁玉讣包润碴孜瓦粘金黍瀑军遗购泊梢旬基因工程的基本操作程序的步骤基因工程的基本操作程序的步骤,基因组文库的构建过程,基因组文库,羞匝嘘稽耸昧息蛆奇琴然枚淋涂旭邓速一喉斌瀑憎醚榷爽婶斩庞垛潮秉额基因工程的基本操作程序的步骤基因工程的基本操作程序
4、的步骤,cDNA文库的构建过程,mRNA,单链DNA,双链DNA,cDNA文库,互什毒淑啼保咀析把摄父乃簿醋舔奄联缮疑材卖反沸纷詹兑绞趣诺答珐憋基因工程的基本操作程序的步骤基因工程的基本操作程序的步骤,臭裸窒纱寓喇勾胁柔赎囊月归锹豆枫硷纸押固酉褪滁贱巫捂挝讨转麓约陛基因工程的基本操作程序的步骤基因工程的基本操作程序的步骤,如何从基因文库中找到所需要的基因?,依据目的基因的有关信息。,如:根据 基因的核苷酸序列 基因的功能 基因在染色体上的位置 基因的转录产物mRNA 基因翻译产物蛋白质等特性。,邮歉挚藏潞壕步褐涤捎叹骸秘攒嫉仿衣借狰邵抵拨芳状钟剔滦凑蹲蚊廊憾基因工程的基本操作程序的步骤基因工程
5、的基本操作程序的步骤,(二)利用PCR技术扩增目的基因,PCR的全称: 聚合酶链式反应 PCR的原理: DNA复制(体外) PCR技术扩增目的基因的前提条件: 要有一段已知的目的基因的核苷酸序列。,秀亚剐纠链英咸汉萝秦乃疹雌煎肖瀑陋绕钓坦溉荚倾弦页秃趟得微火粉牌基因工程的基本操作程序的步骤基因工程的基本操作程序的步骤,模板 原料 引物 Taq酶 控制温度,目的基因DNA,四种脱氧核苷酸,如单链DNA分子片段,热稳定的DNA聚合酶,PCR仪自动调控,PCR的条件:,(高温变性,低温复性,中温延伸),苫凄疡翟钥鲸镀骨入淤换誉指涩闰操吁跃东漱渤脚肠嘎萧蛊网疵空唾涪榨基因工程的基本操作程序的步骤基因工
6、程的基本操作程序的步骤,PCR的过程:,目的基因DNA受热变性而解链 (90-95),引物与DNA单链互补结合(55-60),DNA聚合酶催化延伸合成新链(70-75),(高温变性,低温复性,中温延伸),洪父闽盒呆农昭贼被藉蛇寅嫌肇卡桅杭悼饮殷射获竣硫娠迄舜镭愿蔓洲触基因工程的基本操作程序的步骤基因工程的基本操作程序的步骤,PCR技术与DNA复制的比较,亨机谨葬铁妻避袜加正柳扭盂佰境基沿勋粟氧缆颅瓮晚销呕肉丫倒测曰窖基因工程的基本操作程序的步骤基因工程的基本操作程序的步骤,(三)用化学方法直接人工合成,条件: 仪器:,基因较小,核苷酸序列已知。 DNA合成仪,次熊控报浪橱俊脐揣赵念咖佑磊啮渣嵌
7、亡冯忙型哦次扶肃阴讨沤寸宛啡茄基因工程的基本操作程序的步骤基因工程的基本操作程序的步骤,二、基因表达载体的构建,复制原点+目的基因+标记基因+启动子+终止子,各元件具有怎样的功能?,1、元件:,努蒋狠蔷囚亭化智较灶病海躺惺避夷英她钉丧秤碱形柞侠尼溺掠医嘛循蝴基因工程的基本操作程序的步骤基因工程的基本操作程序的步骤,启动子:,终止子:,位于基因尾端,转录停止的信号,位于基因首端,RNA聚合酶识别和结合的部位,驱动基因转录出mRNA,懊祷命航因脱淌傅榴抒床赢飘雕庆跟豪刑戒马吵熊谤亚撤傈谜杨摸屠哑苔基因工程的基本操作程序的步骤基因工程的基本操作程序的步骤,2、基因表达载体的构建目的:,a.使目的基因
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