ELISA检测溶血素.ppt
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1、本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家,ELISA检测溶血素,本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家,【试剂与器材】,绵羊红细胞(SRBC)免疫小鼠血清 抗SRBC阳性和阴性血清 辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗甲胎蛋白抗体 碳酸盐缓冲液(PH9.6) 磷酸盐缓冲液(PBS,PH7.4) 邻笨二胺液 硫酸(2M) 酶标反应板、微量加样器、温箱、冰箱、酶标仪等。,本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家,【试剂与器材】,包被稀释液(0.05mol/L Na2CO3NaHCO
2、3 缓冲液,PH9.6) Na2CO3 1.5g NaHCO3 2.9g 加双蒸水至1000ml 封闭液(5%小牛血清/PBS 溶液) 小牛血清50ml PBS(PH7.4)950ml 洗涤液(PBST,PH7.4) NaCl 8.0g KH2PO4 0.2g Na2HPO4.12H2O 2.9g KCl 0.2g Tween 20 0.5ml 加双蒸水至1000ml,本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家,【试剂与器材】,样本稀释液(PBS,PH7.4) NaCl 8.0g KH2PO4 0.2g Na2HPO4.12H2O 2.9g KCl 0.2
3、g 加双蒸水至1000ml 酶标第二抗体:羊抗人IgG 标记HRP(1:2000),本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家,【试剂与器材】,底物液(OPDH2O2) A 液 (0.1mol/L 柠檬酸溶液) 柠檬酸19.2g 加双蒸水至1000ml B 液 (0.2mol/L Na2HPO4 溶液) Na2HPO4.12H2O 71.7g 加双蒸水1000ml 临用前取A 液24.3ml,B 液25.7ml 终止液(2mol/LH2SO4 溶液) 双蒸水600ml,浓硫酸100ml(缓慢滴加并不断搅拌),加双蒸水至900ml,本文由探生科技技术人员提供
4、,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家,【操作方法】,(1)包被酶标反应板 用pH9.6 的碳酸盐缓冲液1:200 稀释抗体,用之包被聚乙烯塑料板,每孔加0.2ml, 4C 1224h。 (2)封闭酶标反应板 弃掉包被液,用PBS 洗涤3 次,甩干后用5%小牛血清/PBS 液封闭。放37C40min(或4C 过夜)。封闭结束后用洗涤液洗板,并在滤纸上拍干,每孔洗3遍,每遍3min。,本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家,ELISA平板包被,间接法 抗原包被: 将包被液稀释的抗原(SRBC)BSA (2-10ug/ml)加入96孔酶标版
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