NR2B在小鼠骨癌痛中的作用及机制研究(黄东).ppt
《NR2B在小鼠骨癌痛中的作用及机制研究(黄东).ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《NR2B在小鼠骨癌痛中的作用及机制研究(黄东).ppt(40页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、NR2B在小鼠骨癌痛中的作用及机制研究 中南大学湘雅三医院 黄 东 教授, 目前,全球癌症患者的数量呈, 骨癌痛的具体机制, 癌性疼痛成为影响癌症病人生活 质量的一个严重问题。, 在癌痛中又以骨癌痛最为严重和最难以控制。,?,研究背景,癌痛的特点:,临床上,癌痛表现为进行性加重,常伴随有爆发痛; 癌痛与炎性痛和神经病理性痛存在着不同的外周和中枢机制1 。 如癌痛:胶质细胞增生肥大;GFAP,1 : Honore P. Neuroscience, 2000, 98: 585598., NMDA受体活化是反复伤害性刺激诱发中枢敏化 的基础,是持续性疼痛产生和维持的关键 2 。 大量研究证实:NMD
2、A受体的亚基NR2B在炎性痛、 神经病理痛中参与了伤害性信息传递,在疼痛调 制及痛觉敏化 的形成和维持中发挥重要作用 3 。,疼痛研究进展,2 : Petrenko. Anesth Analg. 2003, 97(4): 1108-1116. 3 : Nagy GG. Eur J Neurosci, 2004, 20 (12): 3301 - 3312.,(一), 研究显示,MAPK信号通路在神经可塑性和炎症 反应的细胞信号转导过程中起重要作用4 。 增生肥大的星形胶质细胞能释放大量胶质纤维酸 性蛋白(GFAP),骨癌痛的产生和维持与脊髓 星形胶质细胞结构和功能的变化密切相关1 。,4 : D
3、e Leo JA. Pain, 2006, 122 (122): 17221.,疼痛研究进展,(二),研究癌痛的确切机制,需要适当的动物模型,现有动物模型仍显不足。,小鼠骨癌痛模型的优势,肺癌是临床骨转移较多见的一种肿瘤,且小鼠在肿瘤 学及神经系统研究方面具有独特的优势。 小鼠作为实验模型,较经济适用 本实验参照Schwei等的方法,将Lewis肺癌细胞接种 于C57BL/6小鼠股骨骨髓腔,建立一个全新的骨癌痛 模型。,我们从如下四个方面加以研究: 1、建立一个小鼠骨癌痛新模型 2、NR2B在骨癌痛小鼠前扣带回和脊髓中的分 布与表达 3、脊髓NR2B基因沉默对小鼠骨癌痛的影响 4、MAPK信号
4、通路介导的NR2B在小鼠骨癌痛中 的作用机制,NR2B是否也参与骨癌痛的发生机制呢?,实施方案: 检测癌痛小鼠脊髓和前扣带回NR2B的表达和分布,分析小鼠NR2B的表达和小鼠疼痛行为学关系。 应用RNA干扰技术,沉默骨癌痛小鼠NR2B基因;通过对比干扰组小鼠与癌痛组小鼠NR2B的表达以及两组小鼠疼痛行为学,从而阐明NR2B是否在癌痛的发生与维持中起重要作用。,对比骨癌痛小鼠NR2B基因沉默前后,MAPK 信号通路及其介导的下游信号分子表达的相应改变; 研究MAPK 信号通路中信号分子表达的相应改变与GFAP的关联性; 探索MAPK信号通路在小鼠骨癌痛中的可能作用机制。,NR2B是怎样参与骨癌痛
5、的发生机制呢?,选用清洁级雄性C57BL/6小鼠,模型组,一般情况观察,行为学测定,内容1技术路线,热灭活组,PBS组,正常对照组,放射学检查,组织学检测,自发痛行为观察,机械性触诱发痛,选用清洁级雄性C57BL/6小鼠,癌痛组,一般情况观察,行为学测定,内容2技术路线,假手术组,正常对照组,实时定量PCR检测NR2B的表达,免疫组化检测NR2B的表达及分布,自发痛行为观察,机械性触诱发痛,Western Blot检测NR2B的表达,选用清洁级雄性C57BL/6小鼠,癌痛组,一般情况观察,行为学测定,内容3技术路线,干扰组,干扰对照组,实时定量PCR检测NR2B的表达,自发痛行为观察,机械性触
6、诱发痛,Western Blot检测NR2B的表达,选用清洁级雄性C57BL/6小鼠,正常组,一般情况观察,行为学测定,内容4技术路线,干扰组,干扰对照组,实时定量PCR检测NR2B、SP、c-fos和GFAP基因的表达,自发痛行为观察,机械性触诱发痛,Western Blot检测NR2B,p-ERK,p-p38和GFAP的表达,癌痛组,结 果,体重和一般状况,图1:观察期内各组小鼠体重的变化,2.行为学测试,图2:自发痛行为观察 图3:机械性触诱发痛测定,3. 放射学检测,图4:模型组小鼠不同时间段术侧股骨X片结果: A为肿瘤细胞接种前摄片;B为接种后第7天; C为接种后第15天;D为接种后
7、第23天。,组织学观察,骨髓腔破坏,肿瘤细胞穿破骨组织,A:接种第7天模型组小鼠股骨切片 B:接种第15天模型组小鼠股骨切片,C:1接种第23天模型组小鼠股骨切片,C2:接种第23天模型组小鼠股骨 周围肌肉组织病检结果,图6:模型组小鼠术侧股骨下段不同时间段的HE染色(HE400),行为学、放射学、组织学三方面证实: C57BL/6小鼠股骨骨髓腔接种Lewis肺癌细胞,能成功制备小鼠骨癌痛模型,且此模型稳定、重复性好,与人类骨癌痛高度相似。, 本研究我们首次选用来源广泛、致瘤作用强的 Lewis肺癌细胞,接种于C57BL/6小鼠股骨骨髓 腔,建立了一个新的小鼠骨癌痛模型。,5、实时荧光定量PC
8、R检测前扣带回和脊髓NR2B的表达,前扣带回NR2B的表达,前脑扣带回NR2BmRNA 相对表达量,脊髓NR2B的表达,图5:脊髓NR2BmRNA 相对表达量,第14天前扣带回NR2B的表达 A癌痛组前扣带回100倍; B癌痛组前扣带回区域200倍 C正常组前扣带回100倍; D正常组前扣带回区域200倍 E假手术组前扣带回100倍;F假手术组前扣带回区域200倍,6、 免疫组化检测前扣带回和脊髓NR2B的表达,前脑扣带回NR2B的表达,L4-L6脊髓NR2B的表达,L4-L6脊髓NR2B的表达(200倍),术后第14天,L4-L6脊髓NR2B的表达,术后第18天,L4-L6脊髓NR2B的表达
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- NR2B 小鼠 骨癌 中的 作用 机制 研究
链接地址:https://www.31doc.com/p-2105953.html