(三)网织红细胞计数.ppt
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1、实验三 网织红细胞计数,一、实验原理 网织红细胞胞浆内残存有嗜碱性的RNA物质,经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后RNA中负电荷基团与带正电荷的有色基团结合,凝聚成颗粒呈浅蓝或蓝黑色的点状、丝状或网状结构,可在显微镜下识别。计数1000个红细胞中所有的网织红细胞数直接报告其百分比,或红细胞计数结果报告其绝对值。,网织红细胞(Ret),是晚幼红细胞脱核后到成熟红细胞间的过渡细胞,是尚未完全成熟的红细胞,其胞浆内残存有嗜碱性的RNA物质。嗜碱性物质与染料凝聚成蓝色颗粒,颗粒与颗粒连缀成线,线连接成网,故而得名。 分型:丝球型、网型、破网型、点粒型。(、型),网织红细胞,计数方法,1、普通光学显微镜法:
2、活体染色后推片镜检 2、网织细胞计数仪法:荧光染色后用流式细胞术计数,二、试剂器材,1、试剂 10g/L煌焦油蓝酒精(水)溶液 2、器材 毛细血管采血用具、小试管、载玻片、推片、显微镜、香柏油、二甲苯及擦镜纸、Miller窥盘或直径约20 mm(较目镜内径稍小)的圆形硬纸片(正中央开一边长为3mm的菱形或正方形小孔,置目镜光阑处,用于缩视野法计数),三、操作步骤,1. 染色:于载玻片的一端加煌焦油蓝酒精溶液1滴,任其自然凉干后备用,取末梢血或抗凝血一滴,于已干燥的染料上,用推片角混匀后,将两玻片盖合(玻片法);试管法取染液2滴入试管,加血2滴混匀,封闭好,待15分钟以上时间, 2. 推片:取混
3、合液1小滴于载玻片的一端,推制成薄而均匀的血膜, 3. 低倍镜浏览,选取红细胞分布均匀网织红细胞染色较好的部分(体尾交界处),滴香柏油转换至油镜,在Miller窥盘下计数小方格中的RBC数和大方格中的网织红细胞数(或数出整个视野中的RBC总数和其中的网织红细胞数,换一视野同法计数至几个视野RBC总数1000为止)。,Miller窥盘,A,3,1,B,将Miller窥盘放在显微镜目镜中,通过窥盘中大小方格间的9比1比例关系计算RBC数和Ret数。,四、计算,1.Miller窥盘法:网织红细胞(Retic)百分率(%)= (大方格内Retic总数)/(小方格内RBC总数9)100% 2.直接计数法
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