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1、实验一、光学显微镜构造和使用,细胞生物学实验规则: 保持实验室和实验台面的整洁; 保持安静有序的实验秩序; 规范操作,爱护仪器设备; 不随意动用不必要的仪器设备,更不可在不懂操作规程的情况下或不按规范使用仪器设备; 实验结束后认真、完整地填写“仪器设备使用记录”,仪器运行出现异常或损坏要及时报告老师,不可私自拆装仪器; 鼓励提出实验设计或操作的改进意见; 独立完成实验报告。,OLYMPUS BX 50 系统显微镜组成部分,OLYMPUS BX 50,光强预置旋钮,粗细准焦旋钮,激发模块,万能聚光镜,孔径光栏拉杆,光路合轴调中, 转动聚光镜高度升降旋钮把聚光镜升高到最高位置; 放入样品,将DIC
2、、起偏器等光学附件移出光路,聚光镜转到明场上; 用4X或10X物镜聚焦,调至清晰; 视场光阑打至最小; 通过调节聚光镜升降旋钮下降聚光镜,使视场中出现清晰正多边形图像; 通过调节聚光镜中心调节旋钮,把正多边形图像移至视场中心位置; 逐步打开视场光阑,如正多边形与视场边缘内切,则聚光镜已正确对中; 实际观察中,稍加大视场光阑,使它的图象刚好与视场外切即可。,光路合轴调中过程,调节装置,暗视野显微镜(DFA),开启照明光源 明场(BF)聚焦 转动万能聚光镜转盘至DFA 起偏器拉出光路 检偏器拉出光路 调节孔径光栏至可见样品 调节载物台使样品聚焦 取下目镜,观察物镜外缘,调节并对中暗场环装置; 装好
3、目镜观察暗场图像,重复对中直至获得光学暗场效果图像 上下移动聚光镜直到获得均匀的暗场照明 将视场光阑开大到获得均匀亮度的程度,暗视野光挡,相差显微镜(Ph),开启照明光源 明场(BF)聚焦 转动万能聚光镜转盘至Ph(X),使匹配的环状光阑进入光路 选择与聚光镜相匹配的同型物镜Ph(X) 起偏器拉出光路 检偏器拉出光路 打开孔径光阑(孔径光阑太小中央可能产生眩光) 对样品聚焦,取下目镜(可换上调中望远镜,CT),调节环状光阑对中螺丝,使亮环和暗环在视场内重叠,(更换不同倍率物镜需重复调节) 取下对中望远镜,换上目镜观察(可插入绿色干涉滤色片,以增大反差)。,相差物镜,对中望远镜,万能聚光镜,视场
4、光阑调节环,简易偏光显微镜,开启照明光源 明场(BF)聚焦 起偏器推入光路 检偏器(U-ANT)推入光路 调节起偏器旋转旋钮以获得暗场(正交尼科尔位置)并固紧旋钮 调节孔径光栏与光照强度至最佳效果(关小孔径光阑可增大图像反差),微分干涉差显微镜(DP),开启照明光源 明场(BF)聚焦 起偏器推入光路 DIC滑座(附检偏器)推入光路,固紧螺丝 顺时针把DIC棱镜控制钮旋转到头 取下目镜可见物镜外缘,同时调节起偏器旋钮至黑色条纹最黑的位置(若为两条黑纹,起偏器旋转90,以使只可见一条黑色条纹)固紧起偏器旋钮; 目镜复位,转动万能聚光镜转盘至DP(DIC棱镜)进入光路 样品聚焦(样品要表面干净),调
5、节孔径光栏与光照强度至最佳浮雕效果(调节视场光阑与视场外切,缩小孔径光阑可增大反差) 旋转DIC调节钮可调节背景干涉色,灰色到品红色连续变化(100-600nm) 背景黑色时为类暗场效果,灰色则获得最大反差的三维图像,品红色则很小的光学延滞都可观察到颜色变化,如结合可旋转载物台则干涉差的方向灵敏性可表现出来。,起偏器 拔出状态,视场光阑调节环,检偏器 拔出状态,DIC滑行器(U-DICT),上附检偏器(U-ANT或U-AN),棱镜控制旋钮,激发模块,紫外防护罩,汞 灯,汞灯调中检验器, 为了延长高压汞灯的使用寿命,一旦启动,不能在少于15分钟内关闭。关闭高压汞灯后,至少10分钟后才能再次启动。 转动转盘或插入滤光片时始终要停在听到卡嗒声处。如果偏离这个位置,遮光板会由于过热而变形。,荧光显微调节装置,荧光显微镜使用注意事项,1. 紫外光有害,注意保护眼、皮肤 2. 荧光弱,曝光时间长,需注意防震 3. 保护标本,避免长时间曝光对标本的照射 4. 标本制作过程中要注意清洁、环境干净 5. 暗室条件,实验报告,简要阐述光学显微镜各种显微功能的光路原理和调节使用方法; 各种光学显微镜的使用注意事项。,
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