草鱼皮胶原蛋白的制备及质研究硕士学位.doc
《草鱼皮胶原蛋白的制备及质研究硕士学位.doc》由会员分享,可在线阅读,更多相关《草鱼皮胶原蛋白的制备及质研究硕士学位.doc(68页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、 硕 士 学 位 论文 草鱼皮胶原蛋白的制备及性质研究 分类号分类号 Q512 学学 号号 2004108001 2 原 创 性 声 明 本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工 作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集 体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已 在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者(需亲笔)签名: 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留 并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电
2、子版,允许论文被查阅和借阅。本 人授权南京农业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索, 可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。 保密,在 年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密。 (请在以上方框内打“”) 学位论文作者(需亲笔)签名: 年 月 日 导师(需亲笔)签名: 年 月 日 R RE ES SE EA AR RC CH H O ON N P PR RE EP PA AR RA AT TI IO ON N A AN ND D C CH HA AR RA AC CT TE ER RI IZ ZA AT TI IO ON N O OF F C CO OL
3、 LL LA AG GE EN N F FR RO OM M S SK KI IN N O OF F G GR RA AS SS S C CA AR RP P byby JianzhongJianzhong ZhangZhang SupervisedSupervised byby AssociateAssociate ProfessorProfessor XinxinXinxin AnAn A A THESISTHESIS SubmittedSubmitted toto NanjingNanjing AgriculturalAgricultural UniversityUniversity I
4、nIn partialpartial fulfillmentfulfillment ofof thethe requirementsrequirements forfor thethe MastersMasters DegreeDegree ofof ScienceScience JuneJune 20072007 目 录 i 毕业设计(论文)原创性声明和使用授权说明毕业设计(论文)原创性声明和使用授权说明 原创性声明原创性声明 本人郑重承诺:所呈交的毕业设计(论文),是我个人在指导教师的指 导下进行的研究工作及取得的成果。尽我所知,除文中特别加以标注和致 谢的地方外,不包含其他人或组织已经发
5、表或公布过的研究成果,也不包 含我为获得 及其它教育机构的学位或学历而使用过的材料。 对本研究提供过帮助和做出过贡献的个人或集体,均已在文中作了明确 的说明并表示了谢意。 作 者 签 名: 日 期: 指导教师签名: 日 期: 使用授权说明使用授权说明 本人完全了解 大学关于收集、保存、使用毕业设计(论文)的 规定,即:按照学校要求提交毕业设计(论文)的印刷本和电子版本;学校 有权保存毕业设计(论文)的印刷本和电子版,并提供目录检索与阅览服 务;学校可以采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保存论文;在不以赢 利为目的前提下,学校可以公布论文的部分或全部内容。 作者签名: 日 期: 草鱼皮胶原蛋白
6、的制备及性质研究 ii 学位学位论论文原文原创创性声明性声明 本人郑重声明:所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所 取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外,本论文不包含任 何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要 贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明 的法律后果由本人承担。 作者签名: 日期: 年 月 日 学位学位论论文版文版权权使用授使用授权书权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意 学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论 文被查阅和借阅。本人授权 大学可以将本学位论文的全部
7、 或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制 手段保存和汇编本学位论文。 涉密论文按学校规定处理。 作者签名:日期: 年 月 日 导师签名: 日期: 年 月 日 目 录 iii 目录目录 摘 要 I ABSTRACT III 第一章第一章 文献综述文献综述 .1 1 胶原蛋白的概念.1 2 胶原蛋白的类型及分布.1 3 胶原蛋白的结构及特性.2 4 胶原蛋白的提取方法.4 5 胶原蛋白及其降解产物在食品工业中的应用.5 5.1 功能性食品和保健品.5 5.2 肉制品改良剂.6 5.3 食品包装材料.6 5.4 食品的涂层材料.6 5.5 在其它方面的应用.6 6 本研究的
8、主要内容及意义.7 第二章第二章 草鱼皮提取胶原蛋白工艺条件研究草鱼皮提取胶原蛋白工艺条件研究 .8 1 材料和方法 8 1.1 材料.8 1.1.1 草鱼皮原材料.8 1.1.2 主要试剂.8 1.1.3 主要仪器.9 1.2 方法.9 1.2.1 预处理对草鱼皮的脱色效果及脱杂蛋白情况.9 1.2.2 预处理对胶原蛋白的溶解性的影响.9 1.2.3 预处理的脱脂效果与常规脱脂效果比较10 1.2.4 胶原蛋白提取条件研究10 1.2.5 羟脯氨酸含量测定11 1.2.6 福林酚法测定蛋白质含量11 草鱼皮胶原蛋白的制备及性质研究 iv 1.2.7 SDS-PAGE 电泳分析.12 2 结果
9、和分析12 2.1 预处理的脱色效果12 2.2 预处理的脱杂蛋白效果13 2.3 预处理对胶原蛋白溶解性的影响14 2.4 预处理的脱脂效果与常规脱脂效果比较15 2.5 胶原蛋白提取条件研究16 2.5.1 鱼皮胶原蛋白在醋酸溶液中溶解性16 2.5.2 鱼皮胶原蛋白在醋酸酶溶液中的溶解性17 2.6 胶原蛋白肽链组成17 3 本章小结20 第三章第三章 草鱼皮酸溶性和酶溶性胶原蛋白提取及性质草鱼皮酸溶性和酶溶性胶原蛋白提取及性质 21 1 材料和方法21 1.1 材料 .21 1.1.1 原材料21 1.1.2 主要试剂21 1.1.3 主要仪器22 1.2 方法22 1.2.1 酸溶性
10、胶原蛋白提取 .22 1.2.2 酶溶性胶原蛋白提取 .22 1.2.3 氨基酸分析23 1.2.4 蛋白质含量测定23 1.2.5 紫外吸收光谱分析23 1.2.6 傅立叶变换红外光谱(FT-IR)分析.23 1.2.7 SDS-PAGE 电泳分析.23 1.2.8 变性温度测定23 2 结果和分析24 2.1 氨基酸组成分析24 2.2 紫外光谱25 2.3 傅立叶变换红外光谱25 2.4 电泳分析27 2.5 变性温度28 目 录 v 3 本章小结29 第四章第四章型和型和型胶原蛋白分离纯化型胶原蛋白分离纯化 .30 1 材料和方法30 1.1 鱼皮和猪皮原材料30 1.2 主要试剂30
11、 1.3 主要仪器30 2 方法31 2.1 胶原蛋白提取纯化方案31 2.2 含尿素 SDS-PAGE 电泳.32 2.2.1 溶液配制32 2.2.2 胶配方33 2.2.3 样品准备33 2.2.4 电泳33 2.2.5 染色和脱色34 3 结果和分析34 3.1 分级盐析型和型胶原蛋白34 3.2 含尿素 SDS-PAGE 电泳分析胶原蛋白肽链.35 4 本章小结38 全文总结 .39 参考文献 .40 致谢 .45 硕士期间研究成果 .46 摘 要 I 草鱼皮胶原蛋白的制备及性质研究 摘要 本文研究了草鱼皮的预处理工艺条件,采用氢氧化钠中添加双氧水方法可以同 时起到脱色、脱杂蛋白、脱
12、脂肪的作用,以及其对胶原蛋白的溶解性的影响。提取 关键参数温度对胶原蛋白提取率及性质的影响;酸溶性胶原蛋白和酶溶性胶原蛋 白的性质区别;草鱼皮和猪皮中型胶原蛋白和型胶原蛋白纯化及电泳鉴定。 1不同浓度双氧水和氢氧化钠溶液处理草鱼皮,可以同时起到脱色、脱杂蛋白 以及脱脂作用,氢氧化钠浓度越高,脱色速度越快,反应也越剧烈,双氧水浓度对 胶原蛋白脱色无明显影响,在 0.1 mol/L 的氢氧化钠溶液含 1双氧水中只需 6 小时 就可以完全脱去色素,在 0.01 mol/L 的氢氧化钠含 1双氧水溶液中,鱼皮浮在溶 液表面色素渐退,无法看到黑色素体转变为淡黄色;0.01 mol/L0.2 mol/L
13、氢氧化 钠能够有效的去除鱼皮中的非胶原蛋白,但是氢氧化钠浓度越高,可能导致胶原蛋 白的降解在预处理溶液中;在 20 条件下,含 1H202 0.01mol/L NaOH 溶液可以 有效脱去脂肪,脱脂率约为 70。 2在含 1双氧水不同浓度氢氧化钠处理鱼皮以后,对鱼皮胶原蛋白性质产生 了影响。在 20 ,1%过氧化氢,0.1 mol/L 的氢氧化钠溶液中处理草鱼皮 24 小时 后,即使在加酶的醋酸中,提取 48 小时,提取率也只有 8。表明胶原蛋白之间发 生了交联,而在 0.01 mol/L 氢氧化钠或 4 条件下处理胶原蛋白,对胶原蛋白的提 取率影响较小,所以只能选择浓度较低的氢氧化钠或在低温
14、处理鱼皮。 3温度和是否加酶对胶原蛋白提取率影响很大。在醋酸溶液或醋酸加酶溶液中, 温度越高,提取率越高。相同温度条件下,醋酸加酶的溶液胶原蛋白提取率高于醋 酸溶液。但是 SDS-PAGE 电泳显示,在 30 条件下,不论醋酸溶液或醋酸加酶溶液 提取的胶原蛋白都发生了变性,胶原蛋白肽链发生了降解,在 4 和 20 提取的 胶原蛋白三螺旋结构保持完整,具有完整生物学活性。 4从草鱼皮中提取的酸溶性胶原蛋白和酶溶性胶原蛋白,紫外光谱分析,最大 吸收峰都接近 223 nm 处;SDS-PAGE 电泳图谱显示:酸溶性胶原蛋白含有较多 、 和多聚体,平均分子量高于酶溶性胶原蛋白,草鱼皮 ASC 和 PS
15、C 热变性温度 分别为 33.8 、34.5 ,只比猪皮的热变性温度(37 )低 3 左右。表明草鱼 皮胶原蛋白在功能食品、医药、化妆品、制药等方面有潜在的应用。 5在 pH 7.4 条件下,在不同盐浓度下分别沉淀草鱼皮和猪皮胶原蛋白,型 胶原蛋白在 1.8 mol/L 盐浓度(pH 7.4)完全沉淀,此时绝大多数型胶原蛋白溶 草鱼皮胶原蛋白的制备及性质研究 II 解在溶液中,最终在 2.5 mol/L 盐浓度(pH 7.4)的条件下沉淀。纯化得到不同盐 浓度的沉淀样品,再用含尿素的 SDS-PAGE 电泳分析,可以将电泳迁移率相同的 1()和 1()区分开,电泳显示,草鱼皮样品中不含 1()
16、,猪皮中 含有 1(),表明草鱼皮仅含有型胶原蛋白,不含型胶原蛋白,猪皮主要含 有型胶原蛋白同时也含少量的型胶原蛋白。 关键词:胶原蛋白;草鱼皮;性质;型胶原蛋白;型胶原蛋白 摘 要 III R RE ES SE EA AR RC CH H O ON N P PR RE EP PA AR RA AT TI IO ON N A AN ND D C CH HA AR RA AC CT TE ER RI IZ ZA AT TI IO ON N O OF F C CO OL LL LA AG GE EN N F FR RO OM M S SK KI IN N O OF F G GR RA AS SS
17、S C CA AR RP P ABSTRACTABSTRACT In this paper, we study grass carp skin pretreatment conditions, using the method of sodium hydroxide adding hydrogen peroxide can bleaching and removing non-collagen and defatted to grass carp skin, the role of its collagen solubility effects. Effects of the key para
18、meter extraction temperature to the collagen extraction rate and characterization, Characterization different between Acid-soluble collagen and enzyme-soluble collagen; Purifying type I and type III collagens from Grass carp skin and pig skin and electrophoresis identification. 1. Different concentr
19、ations of hydrogen peroxide and sodium hydroxide treatment grass carp skin, can also play a role on bleaching, removing non-collagen and defatted. the higher the concentration of sodium hydroxide, the faster shedding pigment. Concentration of hydrogen peroxide had no significant effect on bleaching.
20、 In 0.01 mol/L the sodium hydroxide solution containing 1% hydrogen peroxide, skin floating in surface of the solution, pigment gradual withdrawal, unable to see melanin turn to yellow; 0.01 mol/L-0.2 mol/L sodium hydroxide can effectively remove the skin of non-collagenous proteins, However, the hi
21、gher concentration of sodium hydroxide, may lead to the degradation of collagen protein in the pretreatment solution; At 20 C conditions, 0.01 mol/L NaOH solution containing 1% H202 can effectively remove fat, defatted rate about 70%. 2. The treatment of different concentrations of hydrogen peroxide
22、 and sodium hydroxide, have an impact on the Characterizations of collagen. At 20 C, 1% hydrogen peroxide, sodium hydroxide concentration solution, leaching treatment 24 hours later, have great impact on the Characterizations of collagen, even in the acid+ enzyme xtracted 48 hours, Extraction rate o
23、nly 8%. In the conditions of 0.01 mol/L NaOH or 4 for 草鱼皮胶原蛋白的制备及性质研究 IV dealing with collagen, have less impact on the collagen extraction rate, so it can only choose lower concentrations of sodium hydroxide or low temperature skin. 3. Key parameter temperature of extraction of collagen and pepsin
24、have great impact on the extraction rate. At 4 in the acetic acid + pepsin solution extraction rate more than double extraction rate in acetic acid, At 20 and 30 , the extraction rate of solution containing pepsin is far higher than that of acetic acid. The higher the temperature, the higher collage
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 草鱼 胶原 蛋白 制备 研究 硕士学位
链接地址:https://www.31doc.com/p-2174423.html