真核生物组织DNA的提取.ppt
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1、真核生物组织 DNA的提取,Total DNA extraction from eukaryotic tissue,实验目的,了解真核生物基因组DNA提取的一般原理 通过植物组织DNA的提取,掌握真核生物组织中DNA提取的方法和步骤,高等动物、植物的基因组相当宠大, 如人类细胞基因组由30亿个碱基对组成,果蝇基因组有个碱基对。某特定物种的基因组,包含了该物种生长,发育,繁殖等各项生理活动的几乎全部信息量,因而对真核细胞基因组的结构,组成,以及表达调控的研究是至关重要的,而研究的起点就是要获得纯度高不含蛋白质、糖类、酚、氯仿等污染;基因组相对完整断裂的基因组以便用于以后分析,RFLP分析,基因文
2、库的构建,基因探测等的研究。 真核细胞基因组在提取过程中一般有以下几步,首先是机械法破细胞抽提;然后去除蛋白质,糖类等细胞内杂质污染;最后纯化出。,DNA提取原则,保证DNA结构的完整性 纯化后不应存在对酶有抑制作用的物质 排除有机溶剂和金属离子的污染 蛋白质、多糖、酚类等降低到最低程度 排除其他核酸分子的污染,实验原理,植物细胞内各种DNA(包括基因组DNA和核外DNA)称为总DNA。高等植物的DNA与蛋白质结合成脱氧核糖蛋白(DNP),能溶解在纯水或1mol/L的NaCl溶液中,而不溶于有机溶剂。目前从样品中分离DNA的方法主要有两种,分为CTAB法和SDS法(型表面活性剂,能溶解细胞膜和
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