细胞生物学-3细胞生物学研究方法-02.ppt
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1、基因敲除,基因敲除示意图(1),基因敲除示意图(2),基因敲除原理,Knockout Mice,未来的生物技术,Caenorhabditis elegans,Drosophila melanogaster,Arabidopsis thaliana,C. elegans,Zebrafish,免疫胶体金技术,基本原理: 氯金酸(HAuCl4)在还原剂作用下,可聚合成一定大小的金颗粒,形成带负电的疏水胶状溶液。由于静电作用而成为稳定的胶体状态,故称胶体金。 胶体金标记:实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的过程。,吸附机理:因胶体金颗粒表面负电荷,与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合
2、。用还原法可以方便地从氯金酸值被各种不同颜色的胶体金颗粒。 应用:胶体金粒子对蛋白质有很强的吸附功能,可以与葡萄球菌蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽聚合物等结合,因而在基础研究和临床试验中成为非常有用的工具。,免疫胶体金标定(Immunogold labeling),利用了胶体金颗粒具有高电子密度的特性,在蛋白质与金粒子结合处,在显微镜下可见黑褐色颗粒。因此,可以观察蛋白质的分布区域。,在体外模拟体内的生理环境,培养从机体中取出的细胞,并使之生存和生长的技术为细胞培养技术。培养中的细胞不受体内复杂环境的影响,人为改变培养条件(如物理、化学、生物等外界因素的变化
3、)即可进一步观察细胞在单因素或多因素的影响下的生理功能变化。,细胞培养,人的细胞培养,细胞系: 原代培养物经首次传代成功后即为细胞系,有无限的传代能力。 细胞株: 通过原代培养或经过细胞克隆与选择而建立的、具有特异的性质或标记的细胞系,但是它们具有有限的传代能力。,原代培养:是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。因此,较为严格地说是指成功传代之前的培养,此时的细胞保持原有细胞的基本性质,植物组织培养,植物原生质体培养,植物组织培养,外植体,愈伤组织,新植株,来源于细胞,而不具有完整的细胞结构,但包含了进行正常生物学反应所需 的物质(如供能系统和酶反应体系等)组成的体系即为非细胞体系
4、 近年来非细胞体系在研究DNA复制、RNA转录、蛋白质合成、高尔基体的膜泡运输机制以反细胞核装配(包括染色质装配、核膜装配及核骨架的装配)等。,概念,流式细胞术(Flow Cytometry,FCM) 利用流式细胞仪对处在快速、直线、流动状态中的单细胞或生物颗粒进行多参数、快速定量分析,同时对特定群体加以分选的现代细胞分析技术。 流式细胞仪(Flow Cytometer) 集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算机技术、细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的一种新型高科技仪器。 原理: 将待测细胞染色后制成单细胞悬液。用一定压力将待测样品压入流动室,不含细胞的磷酸缓冲液在高压下从鞘液
5、管喷出,鞘液管入口方向与待测样品流成一定角度,这样,鞘液就能够包绕着样品高速流动,组成一个圆形的流束,待测细胞在鞘液的包被下单行排列,依次通过检测区域。,细胞分选,细胞标记,染色体分选,染色体标记,FACSAria,科研型,特点: 分辨率高 选配多种波长和类型激光器 可把感兴趣细胞分选到特定培养孔或板上(4路和24孔板) 适用于高速分选和多色分析,流式细胞仪检测范围,细胞大小 细胞粒度 细胞表面面积 核浆比例 DNA含量与细胞周期 RNA含量 蛋白质含量,细胞结构,特异性抗原 (细胞表面/胞浆/核) 细胞内细胞因子 细胞活性 酶活性 激素结合位点 细胞受体,细胞功能,流式细胞仪的工作原理,光学
6、系统 激光光源 光收集系统 液流系统 流动室 液流驱动系统 电子系统 光电转换 数据处理系统 细胞分选系统,细胞工程技术是细胞生物学与遗传学的交叉领域,主要利用细胞生物学的原理和方法,结合工程学的技术手段,按照人们预先的设计,有计划地改变或创造细胞遗传性的技术。包括体外大量培养和繁殖细胞,或获得细胞产品、或利用细胞体本身。主要内容包括:细胞融合、细胞生物反应器、染色体转移、细胞器移植、基因转移、细胞及组织培养。,细胞工程,在自发或人工诱导下,两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。基本过程包括细胞融合形成异核体(heterokaryon)、异核体通过细胞有丝分裂进行核融合、最终形成
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- 细胞生物学 研究 方法 02
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