荧光显微成像系统的原理及构成.ppt
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1、荧光显微成像系统的原理及构成,原理,普通光学显微镜 通过普通光源的照明观察标本 荧光显微镜 利用一定波长的光,激发显微镜下标本内 的荧光物质,使之发射荧光,什么是荧光?,物质吸收的短波光,发射出的长波光 特点:荧光波长激发光波长 荧光强度激发光强度 有不同程度的衰减,荧光显微镜的特点,光源能供给大量特定波长范围的激发光, 使受检标本内的荧光物质能获得必要强度 的激发光 具备相应的滤光镜系统。,荧光显微镜的种类,透射式,落射式,目镜,吸收滤色镜,物镜,暗场聚光镜,激发滤色镜,汞灯,透射荧光显微镜原理图,标本,汞 灯,激发滤色镜,分色镜,吸收滤色镜,物 镜,标 本,落射荧光显微镜原理图,透射式 汞
2、灯光源 激发滤色镜 暗场聚光镜 吸收滤色镜,落射式 汞灯光源 激发滤色镜 分色镜 吸收滤色镜,荧光显微镜的主要部件,各部件介绍,光源 多采用200W的超高压汞灯作光源 提供激发光(紫外和蓝紫光) 滤色系统 激发滤色镜:选择激发光的波长 吸收滤色镜:透过荧光,阻挡杂光 (完全阻挡激发光通过),B 透过,B 阻挡,T%,T%,nm,分色镜 反射激发光,透过荧光 暗场聚光镜 来自下面光源的光线经过暗场聚光镜,形成 了横过显微镜视野而不进入物镜的强烈光束。 因此视野是暗的,A 透过,A 反射,T%,物镜 各种物镜均可应用,但最好使用消色差的 物镜 提高荧光图像的亮度,应使用镜口率大的 物镜 目镜 在荧
3、光显微镜中多用低倍目镜,如5和 6.3,荧光图像的记录方法,荧光显微镜所看到的荧光图像具有: 形态学特征和荧光的颜色、亮度 判断结果时,必须将二者结合起来综合判断 记录结果:主观指标(即工作者目力观察) 客观指标(细胞分光光度计、图像 分析仪等),荧光显微摄影技术,由于荧光很易减弱褪色,要及时摄影记录 结果,所以荧光显微镜摄影技术对于记录荧光 图像十分必要。 因紫外光对荧光猝灭作用大,所以曝光速 速度太慢,就不能将荧光图像拍摄下来。 一般研究型荧光显微镜都有半自动或全自 动显微镜摄影系统装置,或用CCD与计算机连 接,将图像存在计算机硬盘上。,CCD,主要功能: 光信号转电信号 电信号转成数字
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