实验三_叶绿体色素的提取、分离和性质分析.ppt
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1、二、实验原理,2.类胡萝卜素,(一)叶绿体色素:,胡萝卜素 叶黄素,(三)叶绿素的光学性质,叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性,表现出一定的吸收光谱,可用分光光度计精确测定。,三、实验材料与试剂,新鲜的菠菜叶片。 95%乙醇 、CaCO3、醋酸铜结晶、浓盐酸、汽油。 量筒,滤纸,大培养皿一只,小培养皿一只,长滴管,剪刀。,四、实验步骤,1、 叶绿体色素提取: 将菠菜叶片擦净,去中脉后取 10g剪碎,加少许碳酸钙和石英砂,再分次加入10mL酒精研磨,过滤,定容至50ml,分装于5个试管内,容量分别为10ml。,2,3,4,5,1,3、叶绿体色素吸收光谱曲线,取1ml提取液于比色杯中(试管2),加3
2、ml95%乙醇。 用95%乙醇作为对照,在400700nm之间每隔20nm测一次光。 记录波长和吸光度A于下表中,并在标准绘图纸上绘出叶绿体色素的吸收光谱曲线。,4、叶绿体色素含量的计算,在标准曲线上查出波长600nm时的叶绿体色素浓度。 叶绿体色素含量(mgg-1)=,5、叶绿素提取液荧光现象观察,取试管3: 从与入射光垂直的方向观察; 再在透射光方向观察叶绿体色素溶液的颜色; 记录叶绿素体色素溶液颜色有何不同 ,分析原因。,6、光对叶绿素的破坏作用,将试管4置于暗处,试管3置于强光下,照射23小时后,观察试管颜色的变化,解释这种现象。,7、铜代叶绿素反应,向试管5中逐滴加入浓盐酸,并不断摇匀,至颜色变化,观察并记录现象; 向变色后的叶绿素溶液中加入少量醋酸铜,并在酒精灯上缓缓加热,观察并记录颜色的变化。 分析原因。,
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