实验四 微生物的染色.ppt
《实验四 微生物的染色.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《实验四 微生物的染色.ppt(36页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、第十章 微生物的实验,实验一 显微镜的使用及细菌,放线菌和蓝细菌个体形态的观察 (一)目的 (1)掌握显微镜的结构,原理,学习显微镜的操作方法和保养. (2)观察细菌,放线菌和蓝细菌的个体形态,学会生物图的绘制. (二)实验器材 (1)显微镜,目测微计,物测微计,擦镜纸,香柏油,二甲苯. (2)示范片 大肠杆菌 小球菌 蓝藻等,(二)、实验内容 1.显微镜的结构 ( 1). 机械部分 (2).光学部分,(2)光学部分 a.目镜 b.物镜: 低倍物镜 高倍物镜 油镜 物镜的性能由数值孔径决定 数值孔径=n*sina/2 显微镜的性能还依赖于物镜的分辨力 分辨力:能分辨两点之间的最小距离的能力 增
2、大数值孔径来提高分辨力. 物镜 N.A.1.25,100*,”OI”,160/0.17,16mm- N.A.1.25数值孔径 100*放大倍数 ”OI”油镜 160镜筒长 0.17要求盖玻片的厚度 16mm焦距 C.聚光器 d.反光镜 f.滤光片,2.显微镜使用和保护 (1)低倍镜的使用法 (2)高倍镜的使用法 (3)油镜的使用法 3.目测微尺,物测微尺及其使用方法 (1)目测微尺 (2)物测微尺 (3)目测微尺的标定 (4)菌体大小的测量 4.细菌,放线菌和蓝细菌个体形态的观察 (四)实验报告,实验三 微生物直接计数法,(一)目的 (1)明确显微镜计数的原理 (2)学习使用血球计数板进行微生
3、物计数的方法 (二)仪器与材料 显微镜 血球计数板 移液管 酵母菌液 (三)血球计数板的结构与计算方法 (1)1625的计数板计算公式 细胞数125小格内的细胞数400101000稀释倍数125 (2)2516的计数板计算公式 细胞数80小格内的细胞数4101000稀释倍数80,四)操作步骤 (1)稀释样品 使每格约5个细胞 (2)取干净的血球计数板,用厚盖玻片盖住中央的计数室,用移液管吸取少许充分摇匀的待测菌液于盖片的边缘,菌液则自行渗入计数室,510min即可计数 (3)将血球计数板置于载物台上,用低倍物镜找到小方格网后换用高倍镜观察计数 每样品重复三次,取平均值,计算每1ml菌液中所含的
4、酵母菌数。 (五)试验报告,实验四 微生物的染色,目的 学习微生物涂片染色的操作技术,掌握微生物的普通染色法(单染色法)和革兰氏染色法 实验仪器和材料 实验步骤 单染色 革兰氏染色,涂片 干燥 固定 染色 水洗 吸干 镜检,取大肠杆菌和枯草杆菌芽孢杆菌(均以无菌操作)分别做涂片,干燥,固定.方法同单染色法 用草酸铵结晶紫染色1min,水洗. 加革氏碘液媒染色1min,水洗 斜置载玻片于一烧杯上,滴加95%酒精脱色,至流洗出的酒精不呈现紫色时,立即用水冲净酒精,脱色时间约20min,或视涂片厚薄而略有差异 用番红(或称沙黄)染液染色12min,水洗 吸干,置于显微镜下观察,阳性者为紫色,阴性者为
5、红色 革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度.如脱色过度,则阳性菌可被误染为阴性菌;而脱色不够时,阴性菌可被误染为阳性菌 菌龄也影响染色结果,如阳性菌培养时间过长,或已死亡及部分菌自行溶解了,都常呈阴性反应,实验五 培养基的制备及灭菌,一 目的 1玻璃仪器的洗涤和灭菌前的准备工作 2掌握培养基的配制方法 3会干热灭菌和高压蒸汽灭菌的操作方法 二 实验材料 三 实验内容 1玻璃器皿的洗涤剂包装 A洗涤 培养皿、试管、锥形瓶等可用去污粉或肥皂,自来水冲净。移液管用洗液浸泡在水冲净。干燥。,B包装 1)培养皿牛皮纸包装 2)吸管的吸端塞棉花约11.5cm,(防细菌吸入口中,避免细管吹入),松紧适宜
6、。用包装纸包移液管尖端。 3)试管和锥形瓶等的管口均堵棉塞,并用牛皮纸 包裹。,2培养基的制备 A步骤 1)配制溶液 取一定容量的烧杯盛入定量无菌盐水,按培养基配方逐一称取各成分,加水溶解,可加热促进,不断搅拌以防原料在杯底烧焦。 2)调pH值 测定培养液的pH, 按要求以10%HCl or 10%NaOH 调至所需pH。 3)过滤 用纱布、滤纸、棉花均可,若杂质少可省略,4)分装 将培养基分装在试管或锥形瓶中(放置培养基玷污管口,避免浸湿棉塞引起杂菌污染),装入试管的量视1试管的大小定,一般斜面培养基时为其高度的1/41/3 5)斜面培养基的制作 将装有琼脂培养基的已灭菌的试管趁热取出,斜置
7、于木棒上,使其斜面长度为试管的1/31/2,代培养基凝固后即成斜面,B 营养琼脂培养基的制备 1)培养基配方:牛肉膏0.75g,蛋白胨1.5g,氯化钠0.75g,琼脂3g,蒸馏水150ml,pH7.6 。0.1Mpa下灭菌20min. 2)操作: a取300ml烧杯一个,装150ml蒸馏水。 b 在药物天平上一次称取配方中各成分,水中溶解,带待琼脂完全溶解后停止加热,补充水分,用10%NaOH调pH =7.6,省略过滤,培养基分装五支试管中,余入250ml锥形瓶,塞上棉塞,包炸好待灭菌 3无菌水制备 1)取250ml锥形瓶装90ml蒸馏水,赛棉塞,包扎,待灭菌 2)取5支18mm*18mm试管
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 实验四 微生物的染色 实验 微生物 染色
链接地址:https://www.31doc.com/p-2188193.html