医学微生物学 实验 脓汁和粪便标本中病原菌的检测-6 (3).ppt
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1、医学微生物学实验 综合性实验三,空气的细菌学检查结果分析 手指皮肤的细菌学检查结果分析,液体或固体标本菌落总数测定,可将标本作十倍、百倍、千倍、万倍稀释。 分别取1ml注入直径9cm的灭菌平皿内。 倾注46营养琼脂培养基大约15ml,混合均匀。琼脂完全凝固以后,37培养48小时。 选择菌落数在30300之间的平板作为菌落总数测定标准。 将计数得到的菌落数乘以稀释倍数得出cfu/g(ml)。,手指皮肤的细菌学检查,第1格为洗手前, 第2格为洗手后, 第3格为消毒后, 第4格空白对照。,2人1块平板,上:甲、丙常规洗手 下:乙、丁标准洗手,甲(丙),乙(丁),丙,丁,医学微生物学实验 综合性实验一
2、,脓汁和粪便标本中病原菌的检测(三) 菌落特征观察P11 细菌纯培养P10 脓汁和粪便标本检验(录像) 油镜使用方法(讲解),细菌在固体培养基中的生长现象,菌落定义:指单个细菌在平板培养基上生长繁殖,形成单一肉眼可见的细菌集团。 菌落特征:大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性。 菌落类型:光滑型(S)、粗糙型(R)、黏液型(M)。 菌苔:指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。,菌落特征P11 大小:大(直径约3mm以上),中(直径约13mm),小(直径约1mm以下)。 形状:圆形,卵圆形、假根形、丝状、不规则等。 边缘:整齐,锯齿状,波浪状,羽毛状。 表面:隆起、平坦、中
3、心凸起、脐形凹陷;光滑或粗糙、湿润或干燥。 溶血性:不溶血,不完全溶血(菌落周围呈草绿色、不透明),溶血(菌落周围出现透明环)。 色素:一般为无色或灰白色,特殊色素有两类:脂溶性色素(菌落本身着色,培养基不着色)和水溶性色素(菌落及培养基均着色)。,细菌的溶血现象,根据细菌对血平板中红细胞的溶解能力可分为以下三种溶血类型,(甲型)溶血:产生溶血素,不完全性溶血,在血平板上菌落周围有12mm半透明的草绿色溶血环。 (乙型)溶血: 呈完全性溶血,在血平板上菌落周围有24mm宽,界限分明,无色透明的溶血环。 (丙型)溶血:不产生溶血素,在血平板上的菌落周围无溶血环。,细菌的纯培养,挑选单菌落: 脓汁
4、标本在普通平板上有黄色、白色两种菌落,菌落的色素是脂溶性的,是细菌本身的颜色。菌落直径2mm左右、圆形、隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐、不透明。 粪便标本在伊红美蓝平板上,有紫黑色、淡粉红色两种菌落,菌落颜色是水溶性的,不是细菌本身的颜色,颜色的产生是因为大肠埃希菌分解乳糖产酸,酸使伊红与美蓝结合,形成紫黑色具有金属光泽、大而隆起、不透明的菌落;菌落直径23mm。致病菌不分解乳糖,菌落呈伊红的颜色,很淡的粉红色,半透明,直径12mm。 选择平板上相同的菌落数多的、典型的、容易挑取的单菌落,进行接种。,37培养24小时,37培养24小时,紫黑色,通常描述的菌落直径和颜色是特指培养1824小时,菌
5、落分布比较稀少的区域、典型的菌落。 若培养物放置时间过长,或者平板上某个部位细菌比较多、菌落比较密集,大肠杆菌菌落颜色可能会发生改变。因为大肠杆菌利用完乳糖以后,就要利用蛋白质,蛋白质分解大多产生碱性物质,中和了乳糖分解时产生的酸。大肠杆菌菌落可能会由原来的紫黑色变成粉红色,和致病菌颜色一样。 不要在菌落密集的区域挑选菌落,它可能是菌落形成单位(CFU),不是单菌落,很容易选错。,37培养36小时,由紫黑色 变成粉红色,斜面接种法P10 (1组4支) 甲普通平板黄色菌落1支斜面 乙普通平板白色菌落1支斜面 丙伊红美蓝紫黑菌落1支斜面 丁伊红美蓝粉红菌落1支斜面 斜面标记:组号、黄色、白色、紫黑
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