医学微生物学 实验 脓汁和粪便标本中病原菌的检测-6 (5).ppt
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1、器材准备,医学微生物学实验 综合性实验一,脓汁和粪便标本中病原菌的检测(五) 糖发酵试验 药敏试验 血浆凝固酶试验 半固体接种法,糖发酵试验,不同细菌具有不同的糖分解酶,分解各种糖的代谢产物也各不相同,有的产酸,有的产酸又产气,据此,可以鉴别各种细菌。 糖发酵管:葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和蔗糖。 指示剂:溴甲酚紫,PH6.8为紫色,5.2为黄色。 原理:多糖单糖丙酮酸、酸性产物(产气) pH指示剂呈酸性变色。 结果:培养基变色无气泡“+” ,培养基变色有气泡“”,培养基不变色“-”。 应用:观察细菌对糖的分解情况,常用于肠道杆菌的鉴定。,细菌的糖发酵试验P16 甲,乙紫黑葡萄糖,乳糖 丙,
2、丁粉红葡萄糖,乳糖,37,24小时,甲,乙,丙 ,丁,实验分组,俩俩相对4人为一组,组号编在电源插座上。 每组按从前到后,从左到右的顺序,分别编号为甲、乙、丙、丁。,甲 乙 4 丙 丁,甲 乙 3 丙 丁,甲 乙 2 丙 丁,甲 乙 1 丙 丁,甲 乙 5 丙 丁,甲 乙 8 丙 丁,甲 乙 7 丙 丁,甲 乙 6 丙 丁,甲 乙 10 丙 丁,甲 乙 9 丙 丁,讲 台,细菌药物敏感性试验P20,磺胺1907年发现,1935年临床应用。青霉素1929年发现,1945年临床应用。 我国住院病人抗菌素使用率达70%,新生儿病房抗菌素使用率达100%。 为了避免抗菌药物使用的盲目性,防止因不合理用
3、药,导致耐药性细菌的增多、药物中毒、治疗失败、菌群失调等问题的发生,用药前(时),做药物敏感性试验。,药物敏感性试验纸片扩散法 将含有定量抗菌素的纸片,平贴在已经接种了试验细菌的平板上。纸片中的抗菌素吸收培养基的水分,溶解后不断向周围扩散,形成递减的梯度浓度。敏感细菌在纸片周围的生长受到抑制,而形成没有细菌生长的抑菌圈 依抑菌圈的有无、大小来判断敏感性。 敏感(Sensitive ):试验细菌所引起的感染,可以用常用剂量的某种抗菌药物治愈。 耐药(Resistant ):试验细菌引起的感染,不能用该种抗菌药物治愈。 试验菌用量以对照琼脂平板表面生长的菌落呈密集或半密集为宜。,实验分工(每人1块
4、平板),甲黄色菌液平板 + 青、链、庆纸片。 乙白色菌液平板 + 青、链、庆纸片。 丙紫黑菌液平板 + 青、链、庆纸片。 丁粉红菌液平板 + 青、链、庆纸片。,实验方法,接种环取菌液36ul2环(注意:操作时,不得同时握持菌液管和平板,以免菌液倒出来,造成污染)。平板密集划线接种细菌(纱窗样)。设计三点,三点之间等边三角距离,点距离平皿边缘约15mm。作标记:青、链、庆。镊子火焰消毒,夹取相应的药物纸片,平贴在已设定的位置上,按压,最后镊子火焰灭菌。371824小时培养,观察结果。 试验菌用量以对照琼脂平板表面生长的菌落呈密集或半密集为宜。,灭菌 取样,甲黄色菌液 乙白色菌液 丙紫黑菌液 丁粉
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