生物:5.3《血红蛋白的提取和分离》课件(新人教版选修1).ppt
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1、课题课题3 3 血红蛋白的提取和分离血红蛋白的提取和分离 专题5 DNA和蛋白质技术 思考1 分离生物大分子的基本思路是什么? 选用一定的物理或化学的方法分离具有 不同物理或化学性质的生物大分子。 思考2 蛋白质的分离和提取的原理是什么? 根据蛋白质各种特性的差异,如分子的 形状和大小、所带电荷的性质和多少、 溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲 和力等等,可以用来分离不同蛋白质。 一、基础知识: 凝胶色谱法(分配色谱法): 1、凝胶: 一些微小多孔的球体(内含许多贯穿的 通道,由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖 ,具多孔的凝胶就叫分子筛) 2、概念:根据被分离物质的蛋白质相对 分子质量的大小,利用具
2、有网状结构的凝 胶的分子筛作用,来进行分离。 3、原理:当不同的蛋白质通过凝胶时,相 对( )的蛋白质容易进入 凝胶内部的通道,路程( ),移动速 度( ),而( )的蛋 白质无法进入凝胶内部的通道,只能在( )移动,路程( ),移动速度( ) ,相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离 。 相对分子质量较小 较长 较慢相对分子质量较大 凝胶外部 较短 较快 4、具体过程 凝胶色谱法分离蛋白质的原理凝胶色谱法分离蛋白质的原理 1、概念:在一定的范围内,能对抗外 来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液 PH发生明显变化的作用叫做缓冲作用,具 有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。 缓冲溶液: 2、作用: 能够
3、抵制( )的对溶液 的( )的影响,维持PH基本不变 。 外界的酸或碱 PH值 3、缓冲溶液的配制 通常由( )种缓冲剂溶解于水 中配制而成。调节缓冲剂的( ) 就可以制得( )使用的 缓冲液。 12 使用比例 在不同PH范围内 人体血液中缓冲液: NaH2PO4 / Na2HPO4 H2CO3 / NaHCO3 电泳: 1、概念:指带电粒子在电场作用下发 生迁移的过程。 2、原理:许多重要的生物大分子,如( )等都具有( ) 在( )下,这些基团会带上( ) 。在 电场的作用下,这些带电分子会向着与其 ( ) 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子 ( )以及分子本身( )、( )的不同使带电
4、分子产生不 同的( ),从而实现样品中各 种分子的分离。 多肽、核酸可解离的基团 正电或负电 所带电荷相反的电极 带电性质的差异 大小 形状 迁移速度 一定的PH 分类: 琼脂糖凝胶电泳和聚丙稀酰胺凝胶电泳。 测定( )通 常用十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙稀 酰胺凝胶电泳 蛋白质相对分子质量 为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶 中加入( )。SDS能使蛋白质发生完全变性 。由几条肽链组成的蛋白质复合体在SDS的作 用下会解聚成单条肽链,因此测定的结果只 是( )。SDS能与各种蛋白 质形成蛋白质SDS复合物,SDS所带负电荷 的量大大超过了蛋白质分子原有电荷量。因 而掩盖了不同种蛋白质间的
5、电荷差别,使电 泳迁移率完全取决于( )。 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于 它所带静电荷的多少以及分子的大小等因素。 SDS 单条肽链的分子量 分子的大小 聚丙烯酰胺凝胶电泳对分离大分子具有 较高的分辨率,但核酸比蛋白质分子大 得多,只能采用较大孔径的琼脂糖凝胶 电泳。核酸分子本身含有大量的磷酸根 ,核酸带负电荷,在电场中向正极移动 。溴化乙啶荧光染料对核酸染色在紫外 线的照射下,发出橙红色荧光。根据荧 光条带的粗细和分布的位置,可以对其 鉴定。 说明: 电泳检测结果 琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳 (四)血红蛋白(四)血红蛋白 在红细胞的组成中 ,约90%是血红蛋 白。它由四个肽链 组
6、成,包括两个 肽链肽链 和两个肽肽 链链。每条肽链环绕肽链环绕 一个亚铁亚铁 血红红素基 团团,可携带带一分子 氧或一分子二氧化 碳。血红红蛋白因含 血红红素而呈现红现红 色 。 二、实验操作二、实验操作 蛋白质的提取和分离一般分为四步: (1)样品处理:包括洗涤红细胞;血红蛋 白稀释;离心等操作收集到的血红蛋白溶 液。 (2)粗分离:透析除去分子较小的杂质。 (3)纯化:通过凝胶色谱法将分子量较大 的杂质蛋白质除去。 (4)纯度鉴定:通过聚丙烯酰胺凝胶电泳 鉴定。 二 实验操作 蛋白质的提取和分离一般分为四步: 1.样品处理 血 液 血浆 水分 固体物质 血浆蛋白 无机盐 磷脂 葡萄糖等 血
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