细胞免疫组织化学特殊染色方法.ppt
《细胞免疫组织化学特殊染色方法.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《细胞免疫组织化学特殊染色方法.ppt(52页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、,细胞免疫组织化学特殊染色方法,特殊染色用于显示标本中的一些结构, 使其在显微镜下与其它组织或细胞区别.,特殊染色,单一特殊染色,复合特殊染色,一种染料对一种组织结构或细胞进行染色,多种染料对多种组织结构或细胞进行染色,糖原染色方法: 糖原为细胞内的多糖或粘多糖, 肝细胞和肌细胞内的糖原最多。 糖原的多少,可以反映机体糖代谢的情况。 例如: 先天性糖代谢紊乱-葡萄糖-6-磷酸酶缺乏、 淋巴肉瘤、间皮瘤、肾上腺瘤,肝细胞内 都可聚集过多的糖原。, 过碘酸-雪夫反应 (periodic acid Schiff reaction, PAS) 原理: 用过碘酸氧化多糖结构的碳键, 使其形成2-醛基,与
2、无色的品红结合生成 紫红色品红复合物,沉淀于细胞内糖原分布部位, 从而可证明多糖或粘多糖的存在。,1、试剂配制 (1)1%过碘酸水溶液: 过碘酸 1g 双蒸水 100ml 将过碘酸溶于双蒸水中,(2)Schiff试剂: 双蒸水 200ml 碱性品红 1g 1mol/L 盐酸 20ml 偏重亚硫酸钠 2g (或亚硫酸氢钠) 活性炭 300mg, 双蒸水煮沸后离火,慢慢加入品红, 搅拌至完全溶解,冷却至50时过滤, 加入盐酸,冷却至25时加入偏重亚硫酸钠 摇荡,密封置于暗处或4冰箱内24h 。 溶液呈草黄色时,加入活性炭摇荡1min 快速过滤。避光4保存备用。,(3)亚硫酸氢纳溶液 10%偏重亚硫
3、酸氢纳 5ml 1mol/L盐酸 5ml 蒸馏水 90ml 用前配制,(4)1mol/L盐酸 36%盐酸 85.6ml 蒸馏水 914.4ml,2、染色步骤,(1) 切片入1%过碘酸液 氧化2-5 min。 充分水洗后,过蒸馏水。 (2)入Schiff 液10-20 min(室温 暗处) (3)入亚硫酸氢纳液洗3次每次2min (去非特异性染色)流水冲洗10min, 过蒸馏水。 (4)Mayer苏木精复染2-3min。流水冲洗, 过蒸馏水,吸干。 从95%乙醇开始脱水、透明、封片。,3、对照,用1%淀粉糖化酶处理对照片20 min.或用唾液 (无气泡)消化对照片30 min 2次。,4、结果,
4、细胞内糖原呈紫红色;对照片为阴性,5、注意事项: (1)糖原易溶于水,要用冷Carnoy液固定 (2)配制Schiff试剂碱性品红杂质太多, 或亚硫酸氢纳潮解,都不能使碱性品红脱色; 盛Schiff试剂的瓶子不宜过大,以免SO2逸出; 若Schiff试剂变成粉红色即失效。,Carnoy固定液: 取纯乙醇、氯仿、冰醋酸,按6:3:1的比例配制, 现配现用。一般固定1-2 h。固定后的组织块 可直接入95%的乙醇脱水。,疏松结缔组织各种成分显示方法: 疏松结缔组织中含有: 胶原纤维、弹性纤维、网状纤维; 巨噬细胞、肥大细胞。,一、 网状纤维 分布:肝、肾、脾、淋巴结等器官内。 纤维直径0.2-2.
5、0m,分支多,交织成网。 网状纤维主要由型胶原蛋白组成,表面被覆糖蛋白,在镀银切片呈黑色称为嗜银纤维。,Gomoris镀银法显示网状纤维 1、取材:淋巴结 2、试剂配制 (1)硝酸银溶液: 硝酸银 10.2g,溶于100ml蒸馏水。 (2)氢氧化钠溶液: 氢氧化钠 3.1g,溶于100ml蒸馏水。,(3)银氨溶液的配置: 取5ml 硝酸银溶液, 缓慢滴加氨水至溶液变得清亮; 再加入5ml氢氧化钠溶液, 此时溶液变黑色再滴加氨水至溶液清亮后, 补加4滴氨水,加蒸馏水稀释至100ml, 保存于棕色瓶中备用。,(4)高锰酸钾溶液:高锰酸钾0.5g, 蒸馏水95ml,3%硫酸5ml (5)氯化金溶液:
6、氯化金 0.2g, 蒸馏水100ml (6)草酸溶液:草酸2ml,蒸馏水98ml (7)硫酸铁溶液:硫酸铁2g, 蒸馏水100ml (8)甲醛溶液:甲醛20ml, 蒸馏水80ml,3、染色程序 (1)新鲜组织10%甲醛固定,石蜡切片, 常规脱蜡入水; (2)入高锰酸钾溶液中5min,水洗1min; (3)入草酸溶液中漂白2min,水洗2min; (4)硫酸铁中媒染2min,水洗1min;,(5)银氨溶液中处理1-5min(25 ), 蒸馏水洗2次,各2min; (6)甲醛溶液中还原5min, 蒸馏水洗2次,各2min; (7)氯化金溶中调色1-3min,蒸馏水洗2次; (8)95%及无水乙醇脱
7、水, 二甲苯透明,中性树胶封片。,4、结果 淋巴结内可见黑色网状纤维, 粗细不等,交织成网。 5、注意事项 配制氨银时氨液不可过多。,二、弹性纤维 分布广泛,弹性纤维较细,直径0.2-1.0m, 交织成网。富有弹性,与胶原纤维交织在一起。 弹性纤维核心部分由均质的弹性蛋白组成; 外周覆盖微原纤维。 在皮肤学和检测幼年机体组织中的弹性结构。 常用的显示弹性纤维的染色有: 地衣红染色、 Gomoris醛品红染色、 Weigert染色等。,地衣红染色显示弹性纤维 1、取材 皮下组织 2、染液配制 地衣红染液: 地衣红0.1g ,70%乙醇100ml,硝酸2ml。 3、染色程序 (1)石蜡切片脱蜡下行
8、至70%乙醇。 (2)地衣红染液,室温,12h或过夜,或37,15-30min. (3)70%乙醇分色,必要时可用0.5%-1%盐酸乙醇分色, 去除胶原纤维颜色。 (4)常规乙醇脱水,二甲苯透明,树胶封片。 4、结果 弹性纤维为棕红色,背景淡棕色。,三、胶原纤维 胶原纤维,粗细不等,直径0.5-10m,波浪状,有分支交织成网。胶原纤维由型胶原蛋白组成。胶原纤维对酸性染料的亲和力强, 如常用的酸性复红及苯胺蓝等,对胶原纤维有选染性,而其它组织不易着色,从而有利于其他组织的复染。 显示胶原纤维的主要方法: 如van Gieson法、 Mallory法、 Masson法等。,Masson s三色染色
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 细胞 免疫 组织化学 特殊 染色 方法
链接地址:https://www.31doc.com/p-2194859.html