血液分析仪及其临床应用ppt课件.ppt
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1、血液分析仪及其临床应用,血液分析仪(hematology analyzer, HA):临床血液一般检查最常用仪器。 50年代,美国库尔特(W.H.Coulter)发明电子血细胞计数仪并申请专利。,血液分析仪优势: 检测项目多 速度快 精度高 易操作,一、检测原理 检测功能: 细胞计数功能 细胞分类功能 检测原理分为2类: (一)电阻抗法 1.电阻抗原理(principle of electrical impedance),又称库尔特原理(Coulter principle),Couler计数原理,孔电流 真空 内电极 外电极 - + 血细胞 悬液 标本杯,2.计数部件结构组成 等渗电解质溶液
2、细胞悬液 小孔管(传感器transducer)宝石孔(直径 100m,厚度约75m) 脉冲数量和大小反映细胞: 数量 体积大小,3.白细胞计数和分类计数原理 仪器将体积为35450fL的血细胞,分为256个通道(channel)。 每个通道:1.64fl 根据细胞大小,分别置于不同的通道中,显示血细胞体积分布直方图(Histogram)。,经溶血素处理脱水后,血细胞体积大小发生了变化! 第一群(3590fl)小细胞区:淋巴细胞(体积最小):一般在3590fl。 第二群(90160fl)是单个核细胞区,(中间细胞): 单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、原始、幼稚细胞、异常细胞等 第三群(16
3、0fl以上)大细胞区:嗜中性粒细胞(体积最大):一般在135-350fl,三分群血液分析仪正常白细胞分类模式图(直方图) 35 90 160 300 400 450(fl),%,仪器组成: 信号发生器 放大器 阈值调节 甄别器 整形器 计数系统,2.电阻抗法红细胞检测原理 (1)红细胞计数和血细胞比容测定 与白细胞计数相似。(%),100 200 300 400 (fl),(2)血红蛋白测定:血红蛋白与溶血剂中的特定试剂结合形成一种血红蛋白衍生物,在530550nm下进行比色。 ICSH推荐用氰化高铁法(540nm比色)。 非氰化溶血剂,如SDS-Hb。 (3)红细胞其他参数检测,3.电阻抗法
4、血小板检测原理 血小板计数(platelet, PLT): 随红细胞在一个系统中进行检测。 直方图在228fl(不同仪器不一)。 血小板平均体积(mean platelet volume, MPV)。,10 20 30(fl),%,(二)光散射法血液分析仪检测原理 组合应用 电学 光学 细胞化学等,细胞流电学和光学检测图(AcT 5diff),光散射法白细胞检测原理类别 (1)激光与细胞化学法 1)过氧化物酶检测通道: 嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞过氧化物酶活性比单核细胞强 淋巴细胞、嗜碱粒细胞无过氧化物酶活性。 散射图定位:X轴为吸光率(酶反应强度)、Y轴为光散射(细胞大小)显示检测结果。 2
5、)嗜碱性粒细胞/分叶核检测通道。,(2)容量、电导、光散射(volume,conductivity, scatter, VCS)法: 血细胞未经任何处理,保持与体内完全相同状态下进行。 VCS法检测原理 细胞体积技术(测量细胞大小) 电导性技术(测量细胞内部结构) 光散射(scatter, S)技术(测量细胞形态、细胞核和细胞颗粒)。,体积 电导 光散射,VCS可显示3种细胞散点图 DF1(体积值和散射光值) DF2(体积值和电导值) DF3(体积值和电导值):只显示basophil,细胞流电学和光学散点图(AcT 5diff),VCS血液分析仪正常白细胞散点图实例,(3)电阻抗与射频法(能透
6、入细胞内,测量核的大小及颗粒的多少): 嗜酸性粒细胞检测系统 嗜碱性粒细胞检测系统 5种白细胞分类检测系统:直流电(direct current,DC)为横坐标,以射频(radio frequency ,RF)为纵坐标。 幼稚细胞检测系统: 幼稚细胞膜脂质较成熟细胞少。 加入硫化氨基酸,与幼稚细胞的结合量多于较成熟的细胞 幼稚细胞对溶血剂有抵抗作用,从而提供幼稚髓细胞信息(immature myeloid information,IMI)。,(4)多角度偏振光散射(multi-angle polarized scatter separation of white cell, MAPSS)法 0
7、:前角光散射(13),可粗略测定细胞大小。 10:狭角光散射(711),可测定细胞内部结构相对特征。 90:垂直光散射(70110),测定细胞核分叶情况。 90:消偏振光散射(70110),区分嗜酸性粒细胞与其他细胞。,2.光散射法红细胞检测原理 低角度(23):测量红细胞体积 高角度(515):测定红细胞血红蛋白浓度 得到MCV、MCH、MCHC测定值,计算出RDW、红细胞血红蛋白分布宽度(red blood cell hemoglobin distribution width,HDW),3.光散射法血小板检测原理 Mie理论(Mie theory of light scatter for
8、homogeneous spheres):当球形化的血小板一个一个通过激光照射区时:,高角度(515):检测细胞折射指数(reactive index,RI); 低角度(23):测量细胞大小。 大血小板与各种碎片如果体积相似,但由于内容物不同,RI相差较大,故能鉴别。,5.网织红细胞计数(reticulocyte,RET)原理 20世纪90年代起,有多种检测原理相似网织红细胞分析仪。 (1)血液分析仪检测原理: 用新亚甲蓝染色使红细胞RNA着色或用荧光染料对RNA进行染色。,检测参数: 网织红细胞绝对值(RET#) 网织红细胞百分数(RET%) 网织红细胞平均体积(MCVr) 网织红细胞成熟指
9、数(RMI) 网织红细胞分布宽度(reticulocyte distribution width, RDWr),新亚甲蓝网织红细胞染色,光散射法网织红细胞检测散点图,二、检测参数 (一)检测参数 中高档仪器检测参数: 20项左右或超过40多项,(二)检测结果及表达形式 表 常见血液分析报告用语及英文缩写词,三、细胞直方图 横坐标为血细胞体积大小 纵坐标为不同体积细胞的相对频率。 (一)白细胞直方图 正常白细胞直方图 出现异常直方图时,常伴警报信号,如“H(high,高)”或“L(low,低)”。,(二)红细胞直方图 正常红细胞分布:50200fl 峰左移 峰右移 双峰 (三)血小板直方图 正常
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