致病菌检验方法((cly).ppt
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1、致病菌检测方法,福建省疾病预防控制中心 陈路瑶,需要检测的致病菌,乙型溶血链球菌 大肠杆菌 绿脓杆菌 金黄色葡萄球菌 志贺氏菌 沙门氏菌,溶血性链球菌,检测依据:GB/T 4789.11-2003 食品卫生微生物学检验 溶血性链球菌检验,检验程序,检 样,葡萄糖肉汤,血平板,血平板(分纯培养),链激酶试验,杆菌肽敏感试验,观察溶血,革兰氏染色,报 告,361 24h,361,361,24h,24h,1、菌落特征:,溶血性链球菌菌落 特征:灰白色细小 针尖样。菌落周围 形成一个2-4mm宽、 界限分明、完全透 明的无色溶血环。,2、革兰氏染色:,乙型溶血性链球菌 为革兰氏阳性球菌, 在镜下呈现为
2、蓝紫 色,圆形,链状排 列。,3、杆菌肽敏感试验,乙型溶血性链球菌 对杆菌肽敏感,在 涂布了该菌菌液的 血平板上贴上杆菌 肽,36培养18 24h,如果有大于 10mm的抑菌带出 现即为阳性。,4、链激酶试验,乙型溶血性链球菌能产生 链激酶,能激活正常人体 血液中的血浆蛋白酶原, 凝固 形成血浆蛋白酶,而后溶 解纤维蛋白。试验中,能 使凝固的血浆完全溶解为 溶解 链激酶试验阳性。,大肠杆菌,依据:GB15979-2002 一次性使用卫生用品卫生标准 附录B3 大肠菌群检测方法,1、发酵试验,取样液5ml接种50ml乳糖 胆盐发酵管,置37培养 24h,如不产酸不产气, 则报告为阴性,如产酸产
3、气,则进行下一步试验。,2、接种平板,乳糖胆盐发酵试验阳性的管, 划线接种伊红美蓝平板。典 型的大肠杆菌菌落为黑紫色 或红紫色,圆形,边缘整齐, 表面光滑湿润,有金属光泽, 也有的呈紫黑色,不带或略 带金属光泽,或粉红色,中 心较深的菌落。,3、革兰氏染色,取疑似菌落作革兰氏 染色镜检,大肠杆菌 为革兰氏阴性杆菌, 镜下呈红色杆状。,5、复发酵,伊红美蓝平板上的 疑似菌落在染色镜 检的同时接种乳糖 发酵管,如有产酸 产气,则可报告检 出大肠杆菌。,绿脓杆菌,依据:GB7918.4-87 化妆品微生物标准检验方法 绿 脓 杆 菌,检验程序:,增 菌 培 养,分 离 培 养,染 色 镜 检,氧化酶
4、试验,绿脓菌素试验,硝酸盐还原产气试验,明胶液化试验,42生长试验,报 告,37培养1824h,37培养1824h,1、增菌培养,如有绿脓杆菌生长, 培养表面多有一层 薄菌膜,培养液常 呈黄绿色或蓝绿色,2、分离培养,绿脓杆菌菌落扁平无定型,向周边扩散或略有蔓延,表面湿 润,菌落呈灰白色,菌落周围培养基常扩散有水溶性色素。,3、染色镜检,取疑似菌落作革兰氏 染色镜检,绿脓杆菌 为革兰氏阴性杆菌, 镜下呈红色短杆状。,4、氧化酶试验,挑取绿脓杆菌可疑菌落 涂在白色滤纸上,加一 滴新配制的1%二甲基对 苯二胺试液,在1530s 内,出现粉红色或紫红 色,为阳性,无色或淡 黄色为阴性。,5、绿脓菌素
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