芽孢杆菌属.ppt
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1、1,第二十二章 芽胞杆菌属 芽胞杆菌属(Bacillus)200多个种,致病的的5个种 炭疽芽胞杆菌(B.anthracis) 蜡样芽胞杆菌(B.cereus) 蕈状芽胞杆菌(B.mycoides) 巨大芽胞杆菌(B.megaterium) 苏云金芽胞杆菌(B.thuringiensis),2,一、炭疽芽胞杆菌 (Bacillus anthracis,B.anthraci ),炭疽是人畜共患的急性传染病 主要是牛、羊等食草类动物的传染病,人可通过接触或摄食病畜及畜产品而感染 皮肤炭疽、肠炭疽、肺炭疽等, 并发败血症,甚至炭疽性脑膜炎,3,形态染色: 致病菌中最大的G+杆菌, 两端平切、竹节状
2、有毒株可有明显荚膜,生物学性状,炭疽芽胞杆菌 亚甲基蓝染色 1000,革兰染色 1000,4,芽胞椭圆形,小于菌体,位于菌体中央 多在有氧条件下形成,2530,在培养基中、土壤内、动物尸体解剖后暴露在空气中,都易形成芽胞 在活体或完整未解剖尸体内不形成芽胞,尸 体严禁解剖,5,培养特性: 需氧或兼性厌氧,生长条件不严格,最适温 度3035 普通培养基扁平、粗糙、不透明、灰白色、 无光泽,边缘不整齐的菌落,低倍镜下菌落边 缘呈卷发状,6,BAP:1215h不溶血,1824h轻微溶血 其他需氧芽胞杆菌大多溶血明显而快速,炭疽杆菌在血琼脂平板中菌落,7,肉汤絮状沉淀生长 明胶371824h表面液化成
3、漏斗状,由于细菌沿穿刺线向四周扩散形成倒松树状。 NaHCO3BAP: -有毒株5%CO2、372448h、产生荚膜 呈黏液型菌落,挑取时呈粘丝状(鉴别要点) -无毒株粗糙型菌落,8,生化反应:,分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、蕈糖, 有些菌能迟缓发酵甘油和水杨素产酸不产气 水解淀粉、还原硝酸盐 不产生吲哚和硫化氢、不利用柠檬酸盐、不 分解尿素 在牛乳中生长24天牛乳凝固缓慢胨化 触酶(+)、卵磷脂酶弱(+),9,抗原构造: 菌体多糖抗原: -与毒力无关,耐热、耐腐败,长时间煮沸仍能与特异性抗体发生环状沉淀反应(Ascoli热沉淀反应)。 -特异性不高,能与其他需氧芽胞杆菌、14型肺炎链球菌、人A血
4、型抗原发生交叉反应。,10,荚膜多肽抗原: -与毒力有关,有抗吞噬作用,有利于细 菌生长和扩散 -荚膜肿胀试验,对本菌鉴定有意义 芽胞抗原: 有免疫原性和血清学诊断价值,11,炭疽毒素: -保护性抗原(PA)、致死因子(LF)、水肿 因子(EF)三个组分 -单独皆无致病性,与PA结合才显示出致病性 -具有抗吞噬和免疫原性,12,抵抗力:,-芽胞抵抗力很强,煮沸10min或干热140 3h才能杀灭 -在干燥土壤中或皮毛中常温下存活数十年致 病力不减,牧场一旦污染,传染性可持续数 十年 -生物武器,13,-芽胞对化学消毒剂抵抗力不一,对碘和氧化 剂较敏感,常用以下方法杀菌: 1:2500碘 10m
5、in、 3%H2O2 1h、 4%高锰酸钾 15min、 0.5%过氧乙酸 10min -对磺胺、青霉素、链霉素、四环素、红霉素、 氯酶素均敏感,14,临床意义,炭疽是人畜共患的急性传染病 主要是牛、羊等食草类动物的传染病,人可通过接触或摄食病畜及畜产品而感染 皮肤炭疽、肠炭疽、肺炭疽等, 并发败血症,甚至炭疽性脑膜炎,15,致病物质,荚膜: 抗吞噬,有利于细菌在组织内繁殖扩散 炭疽毒素: 保护性抗原、致死因子、水肿因子,16,所致疾病,炭疽病: 传染源:患病食草动物及其制品或被污染物 传播途径:接触皮肤炭疽 食用肠炭疽 吸入肺炭疽 可并发败血症,死亡率极高,17,18,乙类传染病 发生肺炭疽
6、按甲类处理,病后可获得持久免疫力,19,要求快速检出、分离鉴定病原菌,以利早期确诊、查清疫源、及时治疗和采取预防对策,三、微生物学检验,20,标本的采集与处理,皮肤炭疽:病灶深部标本 肺炭疽:痰和血液 肠炭疽:粪、呕吐物 脑膜炭疽:CSF、血液 死于败血症的动物,严禁宰杀和解剖,可消 毒皮肤后割取耳朵、舌尖采集少量血液,局 限性病灶可取病变组织或附近淋巴结。,21,无杂菌污染标本:直接接种肉汤增菌或固体培养基 污染杂菌固体标本:加10倍量生理盐水充分浸泡,振 荡1015min 、静置10min,取悬液65水浴30min或 855min杀死杂菌,保留芽胞活性,再增菌和培养 污染杂菌液体标本:离心
7、 ,弃上清液后,加0.5%洗涤 剂振荡1015min ,离心取沉淀物增菌和分离培养,22,生化反应,噬菌体裂解,青霉素抑制,毒力试验,荚膜肿胀试验,23,24,涂片染色: -G染色、荚膜染色、芽胞染色初步报告 -荚膜荧光抗体染色 核酸检测:核酸杂交 分离培养: -BAP、戊烷脒多粘菌素B平板 -2%兔血清肉汤增菌分离培养,25,鉴定试验: 形态和菌落特征 生化试验:表11-1 串珠试验: -接种于含青霉素(0.050.5U/ml)的肉汤 中,37 6h,大而均匀成串的圆球状菌体 -与青霉素抑制细菌细胞壁合成有关 -类炭疽无此现象,26,青霉素抑制试验: 接种于含青霉素5、10、100U/ml琼
8、脂平板, 3724h 生长 受抑制不生长 串珠和青霉素抑制联合试验:,兔血琼脂平板,抑菌环,青霉素纸片,27,噬菌体裂解试验:AP631炭疽噬菌体 NaHCO3毒力试验: 接种于含0.5%NaHCO3和10%马血清的平板, 10%CO2、37、2448h 有毒株形成荚膜黏液型菌落 无毒株不形成荚膜粗糙型菌落 动物试验: 小鼠、家兔或豚鼠皮下接种,28,植物凝集素试验: Ascoli热沉淀试验:可作追溯性诊断,29,Plaque,30,二、 蜡样芽胞杆菌 (Bacillus cereus, B. cereus ),31,形态与染色: - G+大杆菌 -生长6h后即形成圆形芽胞、位于 菌体中心或次
9、末端、不突出菌体 -菌体两端平截,多数呈链状排列 -引起食物中毒的菌株多有周鞭 毛、无荚膜,微生物特性,32,培养特性: 需氧或兼性厌氧 营养要求不高 最适温度3035 普通琼脂平板:菌落较大, 灰白色,表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状,有 蜡样光泽,33,BAP 有溶血 卵黄平板生长迅速,培养3h后,虽看不到菌落,但该菌可分解卵磷脂而形成白色的混浊环,称乳光反应或卵黄反应,34,生化反应: 能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、水杨素、糊 精,产酸不产气 能胨化牛乳,液化明胶,VP(+)、卵磷脂 酶(+) 多次传代后生化特性常可改变,35,抵抗力: 耐热,肉汤中细菌需10020min才能杀死, 食物中毒菌株
10、的游离芽胞耐受10030min、 干热12060min才能杀死 对氯霉素、红霉素、庆大霉素敏感,对青霉 素、磺胺、呋喃类耐药,36,临床意义,食物中毒 含菌量达105/g以上 呕吐型耐热肠毒素 腹泻型不耐热肠毒素 全眼球炎(外伤后) 心内膜炎、败血症和脑膜炎,37,夏、秋季多见 食物有米饭、乳品、禽畜肉类、果汁饮料等,大多为加热烹调过的熟食 在米饭中极易繁殖,由米饭受污染引起的食物中毒在国内、外均为常见 中毒食物大多无腐败、变质现象,感官性状正常,应引起注意,38,微生物学检验,标本采集: 可疑食物、粪便、呕吐物,因食品暴露于空气中,在一定程度都会受到本菌污染,所以不能分离出该菌就认为是引起食
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