蔗糖酶活力测定-二硝基水杨酸法.ppt
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1、实验四,蔗糖酶活力测定 3.5二硝基水杨酸法,一、实验目的和要求 1、掌握酶活力测定的基本原理和方法; 2、学习酶的比活力的计算。,二、实验基本原理 蔗糖酶(-D-呋喃型果糖苷-果糖水解酶EC 3.2.1.26),是一种水解酶。它能催化非还原性双糖(蔗糖)的1,2糖苷键裂解,将蔗糖水解为等量的葡萄糖和果糖(还原糖)。因此,每水解1mol蔗糖,就能生成2mol还原糖。还原糖的测定有多种方法,例如:纳尔逊索模吉(Nelson-Smogyi)试剂比色法,斐林试剂法等。 本实验采用3.5二硝基水杨酸法测定还原糖的含量,由此可得出蔗糖酶水解速度。其原理是3.5二硝基水杨酸与还原糖共热被还原成棕红色的氨基
2、化合物,在一定范围内还原糖的量和反应液的颜色深度成正比。因此可利用分光光度计在500nm进行比色测定,求得样品中的含糖量。此法操作简便、迅速、杂质干扰较小。,蔗糖酶活力单位(u): 蔗糖酶在室温(50), pH4.5的条件下,每分钟水解产生1mol葡萄糖所需的酶量(ml)。 蔗糖酶比活力的计算: 酶的比活力为每毫克蛋白质所具有的酶活力单位数,一般用酶活力单位/mg蛋白质表示。酶的比活力在酶学研究中用来衡量酶的纯度,对于同一种酶来说,比活力越大,酶的纯度越高。利用比活力的大小可以用来比较酶制剂中单位质量蛋白质的催化能力,是表示酶的纯度高低的一个重要指标。 比活力酶的总活力单位数除以总蛋白mg数,
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