遗传病分析3培养细胞染色体制备.ppt
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遗传病的分析3 培养细胞的染色体制备,定 义,在细胞的生长周期中,中期染色体的长短、大小、恒定性正适合我们对其进行分析、研究。 因此利用人工的方法,使大部分分裂细胞处于中期而不向后期转化,并获得之,经处理,制片后观察分析。,器 材,细胞株 普通光学显微镜 冰载玻片 酒精灯,试 剂,0.25%胰旦白酶液 0.075M KCL 秋水仙素 固定液(冰醋酸/甲醇 1:3) Giemsa染液,操 作,1. 收集细胞前6h,培养细胞中加5ug/ml秋水仙素2滴,混匀后继续培养 2. 0.25%胰旦白酶液消化细胞,并收集细胞于离心管中 3. 离心1800转/min10min,弃上清,取沉淀 4. 加0.075M KCL低渗液4ml,充分打匀细胞,室温静置20min 5. 再加入固定液1ml,并与原有的低渗液充分混匀,室温静置5min 6. 离心,弃上清,取沉淀,操 作,7. 加固定液5ml,轻轻打匀,室温静置30min 8. 离心,弃上清,取沉淀 9. 加少量固定液,制成染色体悬液 10. 取1-2滴染色体悬液,滴加在冰玻片上,迅速吹片,酒精灯下烤干玻片 11. Giemsa染色5min,自来水冲洗,待干 后,显微镜下观察,光镜100倍下人染色体G带照片,注 意,浓度与时间 秋水仙素、低渗 临用时新鲜配制 固定液、染液 固定液的比例 制片和染色,
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- 关 键 词:
- 遗传病 分析 培养 细胞 染色体 制备
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