用牛肉膏和蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌的纯化培养.doc
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1、用牛肉膏和蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌的纯化培养,包括两大阶段:制备牛肉高蛋白胨固体培养基计算:根据牛肉膏蛋白胨培养基配方的比例,计算配制100ml培养基中各种成分的用量。称量:准确称取各种成分。溶化:将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯,加入少量的水,加热;当牛肉膏溶化并与称量纸分离后,用玻璃棒取出称量纸;箱烧杯中加入称量好的蛋白胨和氯化钠,玻璃棒搅拌,使其溶解;加入琼脂,加热使其熔化。持续搅拌防止糊底导致烧杯破裂;当琼脂完全熔化,补加自来水至100ml。灭菌:将配置好的培养基转移到锥形瓶中,加棉塞,包上牛皮纸,用皮筋勒紧,放入高压灭菌锅,压力为100KPa,温度为121,灭菌1530min
2、。将培养皿用几层旧报纸包紧,58套培养皿一包,放入干热灭菌箱,160170灭菌2h。倒平板:待培养基冷却至50左右时,在酒精灯火焰附近倒平板。倒平板操作步骤: A将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上,右手拿装有培养基的锥形瓶,左手拔出棉塞;B右手拿锥形瓶,使瓶口迅速通过火焰;C用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,右手将锥形瓶中的培养基(约1020ml)倒入培养皿,左手立即盖上培养皿的皿盖;D等待平板冷却凝固后,将平板倒过来放置,使皿盖在下、皿底在上。小资料:牛肉膏蛋白胨固体培养基配方成分含量提供的主要营养牛肉膏5.0g碳源、磷酸盐、维生素蛋白胨10.0g氮源、维生素NaCl5.0
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